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カスタムsaRNA合成

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IVT RNA

カスタムsaRNA合成

自己増幅型mRNA（saRNA）は、別名レプリコンRNAと呼ばれ、体外転写（IVT）mRNA配列とアルファウイルスまたはフラビウイルス由来のウイルス複製酵素遺伝子をコードします。ウイルス複製酵素遺伝子は、mRNAの自己増幅を可能にし、非増幅型mRNAと比較してタンパク質発現が増加し、必要なRNAの最小用量が得られます。さらに、saRNAは比較的大きな分子（14 kb以上）であるという特徴もあります。

姚海バイオファーマは、非増幅型mRNAおよび自己増幅型mRNA（1000 nt〜14000 nt）を提供するための一連のmRNA合成技術を開発しました。これは、配列設計・最適化、IVT、精製、凍結乾燥、脂質ナノ粒子（LNP）封入などです。すべての製品は厳格な品質管理基準のもとでリリースされます。

図1. IVT mRNAの構造的特徴: 通常型、円形型、自己増幅型mRNA。

自己増幅型mRNAの配列特徴

自己増幅型RNAは、アルファウイルス由来の4つの非構造タンパク質（nsP1、nsP2、nsP3、およびnsP4と指定）で構成されています。これらのうち、nsP1はGTaseおよびN7MTaseという二つの酵素活性を持ち、nsP2はRTPase活性を有しており、これはIVT mRNAにキャップ構造（Cap 0構造）を形成するために重要です。さらに、nsP2はプロテアーゼおよびヘリクレースとしても機能し、全体的なnsP複合体の複雑な処理を助けます。nsP3の正確な機能はまだ不明ですが、さまざまなホスト細胞タンパク質との相互作用を通じて、ホストによる抗ウイルス応答の抑制に寄与します。

アルファウイルスのサブゲノミックプロモーター（SGP）領域は、関心のある遺伝子（GOI）の前に位置しています。SGP要素は、ウイルスのnsPタンパク質をコードする配列の読み飛ばしによって、GOIの転写開始を促進します。

図2 ヤオハイ・バイオファーマ RNASci プラットフォームによるeGFP saRNAの合成および細胞試験。

SaRNAのカスタムソリューション

SaRNAの合成プロトコルはmRNAと似ています： カスタムmRNA合成

  • 配列設計
  • プラミドテンプレートの準備
  • 体外転写（IVT）
  • mRNAの酵素によるキャッピング
  • mRNA共転写キャッピング
  • mRNAの精製
  • mRNAのリヨヒライゼーション
  • LNP 包裹
  • 分析と試験

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