A kétlépcsős enzimatikus lezárással összehasonlítva az egylépéses ko-transzkripciós capping módszer jelentősen csökkentheti a folyamat áramlását. A módszer eredményorientált, és cap analógok hozzáadásával jár az in vitro transzkripciós (IVT) reakcióhoz. A cap analógok a transzkripció kezdetén vihetők be, és a cap szerkezetű mRNS a transzkripció befejezése után nyerhető. A jelenlegi, harmadik generációs cap analógok elkerülhetik a fordított sapkát, és közvetlenül hozzáadhatják a Cap 1 struktúrát a transzkripciós termékhez.
Az mRNS in vivo immunogenitása és transzlációs hatékonysága szempontjából az IVT folyamat gyakran alkalmaz bizonyos típusú módosított NTP-ket, és a szokásos módosított nukleotidok a pszeudouridin (Ψ), az N1-metil-pszeudouridin (N1Ψ) és az 5-metilcitozin (5 mC). .
ábra: Az mRNS ko-transzkripciós és záróreakciójának diagramja
Szolgáltatás részletei
szolgáltatás |
Szolgáltatás részletei |
Szállítási időszak (munkanap) |
Együtt-transzkripciós korlát |
In vitro transzkripciós válasz (Clean Cap analóg) |
1-2 |
| Nukleotid módosítások (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| DNS-templát eltávolítás (DNáz I) |
IVT állapotoptimalizálás – opcionális |
Reakciókomponens tervezés és optimalizálás |
3-7 |
Jellemzők
- Változatos nukleotid-módosítási stratégiák
Számos opcionális nukleotid módosítási stratégia javíthatja a fehérje expresszióját.
- Optimalizált reakciórendszer
Érjen el magas transzkripciós arányt és magas korlátozási hatékonyságot.
Érjen el 95%-ot meghaladó felső határértéket.
- Az RNáz szigorú szabályozása
Hatékonyan akadályozza meg az mRNS lebomlását az RNáz szigorú szabályozásával a kísérleti környezetben és a fogyóeszközökben.
Esettanulmány
A Yaohai Bio-Pharma kifejlesztett egy kiforrott ko-transzkripciós capping folyamatplatformot, tiszta cap analógokat használva a Cap1 struktúra közvetlen hozzáadásához, miközben elkerüli a fordított sapkát. A standardizált minta-előkezelés és a kapilláris elektroforézis (CE) detektálása után az erősített zöld fluoreszcens fehérje (eGFP) mRNS korlátja elérheti a 95%-ot.
Az eGFP mRNS-korlátozás hatékonysága több mint 95%
A ko-transzkripciós capping segítségével előállított eGFP mRNS és mCherry mRNS 293T sejtekbe transzfektálódik, és 48 óra elteltével erős fluoreszcens jel figyelhető meg, ami arra utal, hogy az mRNS hatékonyan expresszálódik 293T sejtekben.
eGFP mRNS és mCherry mRNS expressziója 293T sejtben
HU
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEM
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
