Egyedi saRNS szintézis
Az önamplifikáló mRNS (saRNS), más néven replikon RNS, in vitro transzkripciós (IVT) mRNS szekvenciákat és alfavírusokból vagy flavivírusokból származó vírusreplikáz géneket kódol. A vírusreplikáz gének lehetővé teszik az mRNS önamplifikációját, ami fokozott fehérjeexpressziót és minimálisan szükséges RNS-dózist eredményez a nem amplifikáló mRNS-ekhez képest. Egy másik szempont, hogy a saRNS egy viszonylag nagy molekula (több mint 14 kb).
A Yaohai Bio-Pharma egy sor mRNS-szintézis technológiát hozott létre nem amplifikáló mRNS és önamplifikáló mRNS (1000-14000 nt) biztosítására, mint például a szekvenciatervezés és -optimalizálás, IVT, tisztítás, liofilizálás és lipid nanorészecskék (LNP) kapszulázása. . Minden termék szigorú minőség-ellenőrzési szabványok szerint kerül forgalomba.
1. ábra IVT mRNS-ek szerkezeti jellemzői: hagyományos, cirkuláris és önerősítő mRNS.
Az önamplifikáló mRNS szekvencia jellemzői
Az önamplifikáló RNS négy nem strukturális fehérjét tartalmaz (nsP1, nsP2, nsP3 és nsP4), amelyek alfavírusokból, a venezuelai lovak agyvelőgyulladás vírusából (VEEV) származnak. Ezek közül az nsP1 kettős enzimaktivitást mutat, nevezetesen a GTázt és az N7MTázt, míg az nsP2 RTPáz aktivitással rendelkezik, amely kulcsfontosságú az IVT mRNS lezárásában a Cap 0 struktúra létrehozásához. Ezenkívül az nsP2 proteázként és helikázként szolgál, megkönnyítve a teljes nsP komplex bonyolult feldolgozását. Az nsP3 pontos funkciója továbbra is megfoghatatlan, mégis kölcsönhatásba lép különféle gazdasejtfehérjékkel, ezáltal hozzájárul a gazdaszervezet által kifejtett vírusellenes válasz gyengüléséhez.
Az alfavírus szubgenomikus promoter (SGP) régiója a kérdéses gén (GOI) előtt található. Az SGP elem megkönnyíti a GOI transzkripció beindítását azáltal, hogy megkerüli a virális nsP fehérjéket kódoló szekvencia leolvasását.
2. ábra A Yaohai Bio-Pharma RNASci Platform eGFP saRNS-ének szintézise és sejttesztjei.
A saRNS egyedi megoldásai
A saRNS szintézis protokollja hasonló az mRNS-hez: Egyedi mRNS szintézis
- Sorozattervezés
- Plazmid sablon előkészítése
- in vitro transzkripció (IVT)
- mRNS enzimatikus lezárás
- mRNS ko-transzkripciós korlát
- mRNS tisztítás
- mRNS liofilizálás
- LNP tokozás
- Elemzés és tesztelés
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEM
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
