A cirkuláris mRNS-t (circRNS) széles körben alkalmazzák a gén- vagy fehérjefunkciók vizsgálatában. Eközben népszerű a profilaktikus és terápiás biológiai szerek kifejlesztésében, hasonlóan az mRNS-hez.
A Yaohai Bio-Pharma egy sor cirRNS szintézis technológiát hozott létre a kiváló minőségű RNS biztosítására, mint például a szekvenciatervezés és -optimalizálás, az in vitro transzkripció (IVT), a cirkularizáció/ciklizálás, a tisztítás és a lipid nanorészecskék (LNP) kapszulázása. Minden termék a szigorú minőség-ellenőrzési (QC) szabványok szerint kerül forgalomba.
A lineáris mRNS-hez képest a cirkuláris RNS (circRNS) szerkezete stabilabb, és a jelenlegi nukleinsav-gyógyszer-kutatás egyik fő forró pontja. Különböző területeken széles körben alkalmazható, legyen szó kódoló cirRNS-ről vagy nem kódoló cirRNS-ről, beleértve a fertőző betegségek profilaktikus vakcináit, terápiás onkológiai vakcinákat, terápiás onkológiai gyógyszereket, fehérjepótló terápiát, regeneratív gyógyászatot, sejt- és génterápiát (CGT) , molekuláris szivacs szerepe és RNS aptamer.
folyamat | Választható szolgáltatás | Szolgáltatás részletei | Szállítási időszak (nap) |
circRNA szekvencia tervezés és optimalizálás | Kódolási szekvenciák tervezése és optimalizálása | CDS kodon optimalizálás | 1 |
Nem kódoló szekvenciák tervezése és optimalizálása | Intron és exon szekvencia, homológ kar és távtartó tervezés és optimalizálás | 1-2 | |
Kör alakú plazmid készítmény | Génszintézis | Génszintézis (harmadik fél) | 7-10 |
Plazmid amplifikáció | Plazmid amplifikáció | 2 | |
Plazmid extrakció | |||
Linearizált plazmid készítmény | Plazmid linearizálás és tisztítás | Plazmid linearizálás | 1 |
Linearizációs DNS tisztítás | |||
In vitro transzkripció és ciklizálás | In vitro transzkripció és ciklizálás | In vitro transzkripciós és ciklizációs reakciók | 1-2 |
RNáz R emésztés | |||
Optimalizálás – opcionális | Reakció kompozíció, időoptimalizálás | 2-5 | |
cirRNS tisztítás | Hagyományos tisztítási módszer | Lítium-klorid csapadék | 1 |
Mágneses gyöngy tisztítás | 1 | ||
Nagy tisztaságú cirRNS tisztítás | Preparatív nagy teljesítményű folyadékkromatográfia (HPLC) | 1-2 | |
Puffercsere | Ultrafiltráció | 1 | |
cirkRNS liofilizálás | Mintatöltés | Töltő | 2-3 |
Liofilizálás | Előfagyasztás | ||
Elsődleges szárítás (szublimáció) | |||
Másodlagos szárítás (deszorpció) | |||
cirrRNS-LNP kapszulázás | LNP tokozás | Anyag és folyadék előkezelés | 2 |
Mikrofluidikus eszközkeverés | |||
Puffercsere | Tangenciális áramlási szűrés | 1 | |
sterilizált | Szűrés | ||
A plazmid DNS minőségellenőrzése | Koncentráció/tisztaság | Ultraibolya (UV) spektrofotometria | 1-2 |
Plazmid konformáció | Agaróz gél elektroforézis (AGE) | ||
Kapilláris elektroforézis (CE) – opcionális | |||
A plazmid azonosítása | Restrikciós enzimazonosítás/AGE | ||
A cirkRNS minőségellenőrzése | Koncentráció/tisztaság | Ultraibolya (UV) spektrofotometria | - |
Tisztaság | Agaróz gél elektroforézis (AGE)/E-gél | 0.5 | |
HPLC opcionális | 1 | ||
A cirkRNS-LNP minőségellenőrzése | Kapszulázási hatékonyság | RiboGreen módszer | 1 |
Részecske méret | Dinamikus fényszórás (DLS) | 1 | |
Polidiszperzitási index | Dinamikus fényszórás (DLS) | 1 | |
Zéta potenciál | Dinamikus fényszórás (DLS) | 1 | |
Sejtalapú potenciavizsgálat | Sejttranszfekció | Sejtplating, sejttranszfekció | 4 |
Célfehérje kimutatása | Fluoreszcencia megfigyelés, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Fokozott zöld fluoreszcens fehérje cirRNS-t (eGFP cirrNS), mCherry cirrRNS-t, luciferáz cirRNS-t transzfektáltunk 293T sejtekbe, és kimutattuk a célfehérjét fluoreszcenciával, lumineszcens vagy színjellel, Western blot (WB), enzim-linked immunosorbent assay (ELISA) segítségével.
A Yaohai Bio-Pharma cirRNS-mintáinak sejtalapú hatékonysági vizsgálatai