A Yaohai Bio-Pharma a PIE rendszer (exonok és intronok összehangolása) alapján állít elő cirRNS-t, amely az I. típusú intronok önillesztési funkciójára támaszkodik az RNS ciklizáció eléréséhez. A PIE szerkezetét a T4 td gén vagy a fishy tRNS prekurzor gén felhasználásával tervezték, és az elrendezés a következő:
Az RNS intron és a támogató exon fragmentum két részre oszlik (5'-terminális és 3'-terminális), ahol az 5'-terminális szekvencia átkerül a célszekvencia farkába, a 3'-terminális szekvencia a célszekvencia elejébe kerül. célszekvenciát, és a célgén szekvenciát a közepébe illesztjük be.
A GTP katalízise alatt a PIE szerkezete az intronoktól eltérő szekvenciák ciklizálásához vezet. A ciklizációs sebesség ésszerű fokozási stratégiájával kombinálva a Yaohai Bio-Pharma akár 4 kb méretű szekvenciák ciklizálását is elérheti 80%-ot meghaladó ciklizációs aránnyal.
1. ábra. A cirRNS in vitro keringése a PIE rendszer alapján
Szolgáltatások részletei
| folyamat | Választható szolgáltatás | Szolgáltatás részletei | Szállítási időszak (munkanap) |
| cirkRNS szekvenciatervezés és optimalizálás | Kódoló szekvenciák tervezése és optimalizálása | CDS szekvencia igazítás CDS kodon optimalizálás | 1 |
| Nem kódoló szekvenciák tervezése és optimalizálása | Intron és exon szekvencia tervezés és optimalizálás Homológ karsorozat tervezése és optimalizálása Távtartó sorozat tervezése és optimalizálása | 1-2 |
Az mRNS szekvenciatervezés közös stratégiái
| CircRNA komponensek | Biológiai funkciók | Optimalizálási stratégiák |
| Kétterminális intron és exon szekvenciák | GTP-katalizált intron önillesztés az intronon kívüli szekvenciák ciklizálására. | A T4 td gén vagy a halolaj tRNS prekurzor génje szerint tervezték. |
| Kódolás | IRES | Belső riboszóma felismerő hely, amely szabályozza a cirRNS transzlációját. | Különböző vírusforrásokból, pl. EMCV, CVB3 forrásokból származó belső riboszóma belépési hely (IRES) szekvenciák szűrése. |
| CDS | Fehérjét kódoló régiók, antigéneket, antitesteket vagy más funkcionális fehérjéket kódoló szekvenciák. | A kodonoptimalizálás növeli a fordítás szintjét; bizonyos nem optimális kodonok szerepet játszhatnak a fehérje feltekeredésében. |
| Nem kódolás | Nem kódoló szekvenciák | Célozzon miRNS-eket vagy fehérjéket a gén- vagy fehérjeszabályozás kifejtéséhez. | A miRNS-ek vagy fehérjék specifikus kötőhelyeinek megcélzása megismételheti a kötőhely szekvenciáját. |
Jellemzők
- Optimalizált PIE ciklizációs rendszer Kombináció ésszerű optimalizálási stratégiákkal a 80%-nál nagyobb ciklizációs arány elérése érdekében;
- Élvonalbeli CDS-optimalizálási csapat Együttműködés professzionális mesterséges intelligencia-algoritmus csapattal a CDS régió kodonjainak optimalizálásának befejezése érdekében;
- Az érett és tökéletes folyamatú cirRNS magas ciklizációs hatékonysággal, nagy stabilitással és magas transzlációs hatékonysággal érhető el.
Esettanulmány
A Yaohai Bio-Pharma piacra dobta a fokozott zöld fluoreszcens fehérje (eGFP) cirRNS-t, amely a PIE rendszeren alapul az RNS ciklizálásának elérése érdekében.
Hagyományos transzfekciós reagens segítségével az eGFP cirRNS-t a 293T sejtekbe transzfektálják, és 24 óra elteltével az eGFP (zöld) fluoreszcens jel detektálható, ami 48 óra elteltével erősödik. A fluoreszcens jel a 7. és a 14. napon is kimutatható. transzfekció.
Az eGFP cirkRNS in vitro expressziós validálása
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEM
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
