az 5'-végű kapcsolódás az mRNA fontos módosítása. A kalapstruktúrával rendelkező mRNA-k, különösen a Cap1 struktúrák, segítségével képesek lesznek elkerülni az élettani szinten a természetes immunválaszt, ami hatékony fehérjegyártást eredményez.
Az enzimatikus kalapozás (a kétlépéses módszer) a konvencionális mRNA-kalapozási módszer, hasonlóan az eukariotákbeli kalapozási folyamatokhoz. Egy sor enzim hatására a 7-metylguanin (m7G) hivatkozik az mRNA 5'-végéhez egy 5'-5' tripofoszfát kötés által, és metilációs módosítást vesz igénybe a Cap 1 (m7GpppN) struktúra formálásához.
A természetes kalapstruktúra képzésének diagramja
Az enzimatikus kalapozási reakció folyamata az alábbi:
Lineáris plazmid-DNAt használják sablonként in vitro transkripcióra (IVT) T7 polymeráz jelenléte esetén, és mRNA-t kapcsolóstruktúrával képznek egy lépéses megfehérítés után a vaccinia fedő enzim és 2'-O-metilátus felhasználásával.
Szolgáltatások részletei
Opcionális Szolgáltatás |
Szolgáltatás részletei |
Szállítási idő (Nap) |
mRNA enzimatikus fedés |
Enzimatikus fedési reakció |
1 |
Fedési reakció optimalizálása - opcionális |
Reakciós komponensek tervezése és optimalizálása |
3~7 |
Funkcióink
- Fedési reakció komponensének tervezése és optimalizálása
A fedési reakció komponense optimalizálva, és az mRNA-transkript termelése jelentősen növekszik.
- In vitro kifejezési ellenőrzés
A csúcsos mRNA-t transzfektálják a 293T sejtbe, és a célpontos proteinek kifejezését észlelhetővé lehet tenni.
A kísérleti környezet és anyagok szigorú RNáz-ellenőrzése révén hatékonyan elkerülhető az mRNA degradációja.
Esettanulmány
A Yaohai Bio-Pharma mRNA platformja tökéletes csúcsolási reakciós folyamatot fejlesztett ki.
Az eGFP mRNA-nak, egy enzimatikusan csúcsolt mRNA előterméknél, magas szinten észlelhető egy eGFP fluoreszcencia jele (zöld fluoreszcencia) a 293T sejtek transzfekcioja után 24 órával, amelyet Western Blot (WB) metódussal észlelnek, emiatt látható, hogy a cél proteinnel, az erősített zöld fluoreszcens proteinnel (eGFP) hatékonyan kifejezhető in vitro.
Enzimatikusan csúcsolt eGFP mRNA kifejezése 293T sejtben
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
