Egyéni saRNA szintézis
A magukat reprodukáló mRNA (saRNA), más néven replicon RNA, in vitro transkripció (IVT) mRNA-sorozatokat és vírus-replikázót kódoló géneket tartalmaz, amelyek alphavírusokból vagy flavivírusokból származnak. A vírus-replikázó gének lehetővé teszik az mRNA mag automatikus megszaporítását, ami növeli a fehérgek kifejezését és csökkenti az RNA minimálisan szükséges doszist nem reprodukáló mRNÁkhoz képest. Ezenkívül az saRNA egy viszonylag nagy molekula (több mint 14 kb).
A Yaohai Bio-Pharma kidolgozott egy sor mRNA szintézis technológiát nem reprodukáló mRNA és önmagukat reprodukáló mRNA (1000 nt~14000 nt) szolgáltatására, például sorozat tervezésére és optimalizálására, IVT-re, tisztításra, lyofilizációra és lipidnanoparticula (LNP) zárásra. Minden termék kibocsátása szigorú minőségbiztosítási szabványok alapján történik.
Ábra 1. IVT mRNA-k szerkezeti jellemzői: Konvencionális, körös és önmagukat reprodukáló mRNA.
Önmagukat reprodukáló mRNA sorozati jellemzői
Az önmagát felgyorsítő RNA négy nem-strukturális fehérje (nsP1, nsP2, nsP3 és nsP4) tartalmaz, amelyek alphavírusokból származnak, pontosabban a venezuelai egyenlőségi encephalitis-vírusból (VEEV). Ezek közül az nsP1 kétzenstű enzimtulajdonságokkal rendelkezik, nevezetesen GTázissal és N7MTázissal, míg az nsP2 RTPázist tehetőképességgel bír, ami kulcsfontosságú az IVT mRNA fedezéséhez Cap 0 szerkezet létrehozásához. Emellett az nsP2 proteázis és helikázis funkciókat is elvégzett, amelyek segítenek a teljes nsP komplexum finomfeldolgozásában. Az nsP3 pontos funkciója még mindig rejtélyes, de interakciókat hoz létre különböző gazdag fehérjékkel, így hozzájárulva a gazdag antivirális válasz lecsillapításához.
Egy alphavírus algenomos promotor (SGP) régió helyezkedik el az érdeklődési génet (GOI) előtt. A SGP elem lehetővé teszi a GOI transzkripció kezdését, áthidalva azt a sorozat olvasását, amely a vírusi nsP fehérjéket kódolja.
Ábra 2. Az eGFP saRNA szintézise és sejtpróbái a Yaohai Bio-Pharma RNASci Platformon.
Egyéni megoldások saRNA-ra
Az saRNA szintézis-protokollja hasonló az mRNA-hoz: Egyéni mRNA szintézis
- Sorozat tervezése
- Plazmid-sablon előkészítése
- in vitro transzkripció (IVT)
- mRNA enzimatikus fedés
- mRNA ko-transkripciós fedés
- mRNA szivárgatása
- mRNA lyofilizálása
- LNP befészles
- Analízis és Tesztelés
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
