Az mRNA hatékonysági vizsgálat jelentősége
Az mRNA oltások és terápiák gyors fejlődésével szükség van egy specifikus elemzési panelre az összetevők hatékonyságának (biológiai tevékenységük meghatározására) teszteléséhez, amely az mRNA fordítási hatékonyságát érinti. Ezek a módszerek általában sejttranszfekcióra és a célpontos bírányváltozatra alapoznak.
A Yaohai Bio-Pharma mRNA gyógyszerek vagy LNP termékek sejtbázisú hatékonysági vizsgálatokat kínál, beleértve a sejttranszfekciót (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 sejtek stb.) és az ELISA vagy Western Blotting (WB) vizsgálatokat.
Szabályozási követelmények a hatékonysági vizsgálatokra
A WHO szabályozási megfontolásai szerint: „Mindez egyes szelekció után a végleges oltóanyag mindegyik szelejének erősségét alkalmasan mennyiségi és érvényesített funkcionális módszerrel (mód) kell meghatározni. A potenciális in vitro erősségi vizsgálatok közé tartozhatnak az agyagtól független transzfekciós rendszerek vagy az agyagtól független vizsgálatok.” Az USP egy „sejtalapú vizsgálatot” javasolt az mRNA erősségének tesztelésére, azonban a célprotein kifejezésére.
Eljárás
Lépés 1. Sejtalapú transzfekció mRNA-val vagy mRNA-LNP-vel
A sejteket kultúrázzák és transzfekcióval mRNA-val vagy mRNA-LNP-vel. Részletesebben, az mRNA-t egy transzfekciós ütő anyaggal keverve transzfekcióra használják, míg az mRNA-LNP közvetlenül transzfekálja a sejteket. 24-48 óra múlva centrifugálással tisztítják a kifejezett proteint tartalmazó feloldott anyagot.
Lépés 2. A célprotein funkcionális vizsgálatok
Hajtsa végre az ELISA vagy WB teszteket a célpontos bírányított funkcionális kötés értékeléséhez.
Esettanulmány
Sejtbázisú hatékonysági tesztek mRNA mintákból
A Yaohai-BioPharma fejlesztette ki egy sejtbázisú hatékonysági tesztelési módszert az mRNA-k számára, amely sejt-kultúrát, sejt-transzfekciót és fehérje-funkcionális teszteket tartalmaz. Az eGFP mRNA-t, mCherry mRNA-t, luciferáz mRNA-t, illetve a spik fehérje mRNA-t transzfektáltuk 293T sejtbe, és fluoreszcencia, lumineszcencia vagy színes jelek, valamint WB és ELISA segítségével riairtuk a célfehérjeket.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
