در فرآیند آماده سازی mRNA ژن رونویسی آزمایشگاهی (IVT)، DNA پلاسمید خطی شده به عنوان الگوی رونویسی برای IVT با کمک RNA پلیمراز T7 مورد نیاز است. DNA پلاسمید با کیفیت بالا برای رونویسی آزمایشگاهی بسیار مهم است.
بر اساس پلت فرم خدمات آماده سازی پلاسمید بالغ، Yaohai Bio-Pharma می تواند یک سرویس آماده سازی DNA پلاسمید خطی شده با خلوص بالا و استاندارد بالا را برای دستیابی به رونویسی کارآمد IVT ارائه دهد.
روند | خدمات اختیاری | جزئیات خدمات | مدت تحویل (روز کاری) |
آماده سازی پلاسمید دایره ای | سنتز ژن | سنتز ژن (شخص ثالث) | 7-10 |
تقویت پلاسمید | تقویت پلاسمید | 2 | |
استخراج پلاسمید | |||
آماده سازی پلاسمید خطی شده | خطی سازی و خالص سازی پلاسمید | خطی سازی پلاسمید | 1 |
خطی سازی تصفیه DNA | |||
کنترل کیفیت DNA پلاسمید | خلوص غلظت | اسپکتروفتومتری فرابنفش (UV). | 1-2 |
ترکیب پلاسمید | الکتروفورز ژل آگارز (AGE) | ||
الکتروفورز مویرگی (CE) - اختیاری | |||
شناسایی پلاسمید | شناسایی آنزیم محدود کننده/ AGE |
انتخاب انعطاف پذیر روش های خطی سازی
بهینهسازی روشهای استخراج و خالصسازی DNA برای دستیابی به نرخ بازیابی بالا.
استانداردهای سختگیرانه کنترل فرآیند، با نرخ ترکیب فوق مارپیچی نمونه های پلاسمید برای تحقیقات بیش از 80٪.
خدمات آماده سازی پلاسمید و کنترل کیفیت با استاندارد بالا و کارایی بالا برای رفع نیازهای آزمایشی.
با در نظر گرفتن محصول mRNA_luciferase کاتالوگ Yaohai Bio-Pharma، نمونه پلاسمید الگوی رونویسی (درجه تحقیق) دارای نسبت ابرمارپیچی بیش از 90٪، نسبت خطی سازی نزدیک به 100٪ و نسبت رونویسی بعدی تا 1:200 است. DNA پلاسمید خطی شده: mRNA).
mRNA_luciferase به دست آمده از طریق تهیه یک پلاسمید خطی شده به عنوان یک الگو به سلول های 293T ترانسفکت می شود و فعالیت واکنش آنزیم- سوبسترا 24 ساعت پس از ترانسفکشن ارزیابی می شود.
سیگنال فعالیت لوسیفراز قوی آشکار می تواند شناسایی شود، به عنوان مثال، پروتئین لوسیفراز به طور موثر بیان می شود، نشان می دهد که خلوص الگوی رونویسی می تواند به طور کامل نیازهای آماده سازی mRNA با کیفیت بالا را برآورده کند.
سنجش نسبت پلاسمید فوق سیم پیچ
اعتبار سنجی بیان mRNA لوسیفراز در شرایط آزمایشگاهی