صفحه اصلی > IVT RNA > سنتز RNA سفارشی > سنتز mRNA سفارشی > پوشش آنزیمی mRNA
پوشش 5'-انتها یک اصلاح اساسی mRNA است. mRNA هایی با ساختارهای کلاهک، به ویژه ساختارهای Cap1، mRNA ها را از پاسخ های ایمنی ذاتی در داخل بدن فرار می کنند و در نتیجه ترجمه پروتئین کارآمدی را به همراه دارند.
پوشاندن آنزیمی (روش دو مرحله ای) روش مرسوم درپوش mRNA است که مشابه فرآیند دربندی در موجودات یوکاریوتی است. تحت تأثیر یک سری آنزیم، 7-متیل گوانین (m7G) از طریق یک پیوند تری فسفات 5'-5' به انتهای mRNA متصل می شود و تحت اصلاح متیلاسیون قرار می گیرد تا ساختار کلاهک Cap 5 (m1GpppN) را تشکیل دهد.
نمودار شکل گیری ساختار کلاهک طبیعی
جریان واکنش درپوش آنزیمی به شرح زیر است:
DNA پلاسمید خطی شده به عنوان الگویی برای رونویسی آزمایشگاهی (IVT) در حضور T7 پلیمراز استفاده می شود و mRNA با ساختار انتهای کلاهک 5' پس از خالص سازی یک مرحله ای با استفاده از آنزیم پوشاننده واکسینیا و 2'-O تشکیل می شود. -متیل ترانسفراز
خدمات اختیاری | جزئیات خدمات | مدت تحویل (روز) |
پوشش آنزیمی mRNA | واکنش درپوش آنزیمی | 1 |
بهینه سازی واکنش درپوش - اختیاری | طراحی و بهینه سازی اجزای واکنش | 3 ~ 7 |
مولفه واکنش پوششی بهینه شده است و تولید رونوشت mRNA تا حد زیادی افزایش می یابد.
mRNA سرپوشیده به سلول های 293T ترانسفکت می شود و بیان پروتئین هدف قابل تشخیص است.
از طریق کنترل دقیق محیط آزمایشی RNaseson و مواد مصرفی، از تخریب mRNA به طور موثر جلوگیری می شود.
پلتفرم mRNA شرکت Yaohai Bio-Pharma یک فرآیند واکنش پوششی عالی ایجاد کرده است.
برای mRNA eGFP، یک پیش محصول mRNA تهیه شده با دربندی آنزیمی، یک سیگنال فلورسانس eGFP (فلورسانس سبز) در سطح بالایی را می توان پس از ترانسفکت کردن سلول های 293T به مدت 24 ساعت مشاهده کرد که توسط Western Blot (WB) شناسایی می شود و نشان می دهد که پروتئین فلورسنت سبز تقویت شده با پروتئین هدف (eGFP) را می توان به طور موثر در شرایط آزمایشگاهی بیان کرد.
بیان mRNA ژن eGFP درپوش آنزیمی در سلول 293T
Yaohai Bio-Pharma بیش از 14 سال بر راه حل های میکروبی CRDMO تمرکز کرده است. ما خدمات بیولوژیک یک مرحله ای را برای مشتریان در سراسر جهان ارائه می دهیم.
No. 801, Jiankang Avenue, Taizhou, Jiangsu, China
کپی رایت © Yaohai Biopharmaceutical Co., Ltd. کلیه حقوق محفوظ است | سیاست حفظ حریم خصوصی | نقشه سایت
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
نه
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN