mRNA دایره ای (circRNA) به طور گسترده ای در مطالعه عملکرد ژن یا پروتئین استفاده شده است. در همین حال، در توسعه بیولوژیک های پیشگیرانه و درمانی، مشابه mRNA، محبوب است.
Yaohai Bio-Pharma مجموعهای از فناوریهای سنتز circRNA را برای ارائه RNA با کیفیت بالا، مانند طراحی و بهینهسازی توالی، رونویسی در شرایط آزمایشگاهی (IVT)، چرخهسازی/چرخهسازی، خالصسازی و کپسولهسازی نانوذرات لیپیدی (LNP) ایجاد کرده است. همه محصولات تحت استانداردهای کنترل کیفیت دقیق (QC) عرضه می شوند.
در مقایسه با mRNA خطی، RNA دایره ای (circRNA) از نظر ساختاری پایدارتر است و نقطه داغ اصلی در تحقیقات فعلی داروهای نوکلئیک اسید است. طیف گسترده ای از کاربردها در زمینه های مختلف، چه به عنوان circRNA کد کننده و چه به عنوان circRNA غیر کد کننده، از جمله واکسن های پیشگیری کننده برای بیماری های عفونی، واکسن های سرطان شناسی درمانی، داروهای سرطان شناسی درمانی، درمان جایگزین پروتئین، پزشکی احیا کننده، سلول درمانی و ژن درمانی (CGT) نقش اسفنج مولکولی و آپتامر RNA.
روند | خدمات اختیاری | جزئیات خدمات | مدت تحویل (روز) |
طراحی و بهینه سازی توالی circRNA | طراحی و بهینه سازی توالی کدگذاری | بهینه سازی کدون CDS | 1 |
طراحی و بهینه سازی توالی های غیر کدگذاری | توالی اینترون و اگزون، طراحی و بهینه سازی بازوی همولوگ و اسپیسر | 1-2 | |
آماده سازی پلاسمید دایره ای | سنتز ژن | سنتز ژن (شخص ثالث) | 7-10 |
تقویت پلاسمید | تقویت پلاسمید | 2 | |
استخراج پلاسمید | |||
آماده سازی پلاسمید خطی شده | خطی سازی و خالص سازی پلاسمید | خطی سازی پلاسمید | 1 |
خطی سازی تصفیه DNA | |||
رونویسی و چرخه سازی در شرایط آزمایشگاهی | رونویسی و چرخه سازی در شرایط آزمایشگاهی | واکنشهای رونویسی و چرخهسازی در شرایط آزمایشگاهی | 1-2 |
هضم RNase R | |||
بهینه سازی - اختیاری | ترکیب واکنش، بهینه سازی زمان | 2-5 | |
خالص سازی circRNA | روش تصفیه معمولی | بارش لیتیوم کلرید | 1 |
تصفیه مهره مغناطیسی | 1 | ||
خالص سازی سیرک RNA بسیار خالص | کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا (HPLC) | 1-2 | |
تبادل بافر | اولترافیلتراسیون | 1 | |
لیوفیلیزاسیون circRNA | پر کردن نمونه | پر کردن | 2-3 |
لیوفیلیزاسیون | پیش انجماد | ||
خشک کردن اولیه (تععید) | |||
خشک کردن ثانویه (داجذب) | |||
انکپسولاسیون circRNA-LNP | کپسوله سازی LNP | پیش تصفیه مواد و مایعات | 2 |
مخلوط کردن دستگاه میکروسیال | |||
تبادل بافر | فیلتراسیون جریان مماسی | 1 | |
سترون | تصفیه | ||
کنترل کیفیت DNA پلاسمید | غلظت / خلوص | اسپکتروفتومتری فرابنفش (UV). | 1-2 |
ترکیب پلاسمید | الکتروفورز ژل آگارز (AGE) | ||
الکتروفورز مویرگی (CE) - اختیاری | |||
شناسایی پلاسمید | شناسایی آنزیم محدود کننده / AGE | ||
کنترل کیفیت circRNA | غلظت / خلوص | اسپکتروفتومتری فرابنفش (UV). | - |
خلوص | الکتروفورز ژل آگارز (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC - اختیاری | 1 | ||
کنترل کیفیت circRNA-LNP | راندمان کپسولاسیون | روش ریبوگرین | 1 |
اندازه ذرات | پراکندگی دینامیک نور (DLS) | 1 | |
شاخص چند پراکندگی | پراکندگی دینامیک نور (DLS) | 1 | |
پتانسیل زتا | پراکندگی دینامیک نور (DLS) | 1 | |
سنجش قدرت مبتنی بر سلول | انتقال سلولی | آبکاری سلولی، ترانسفکشن سلولی | 4 |
تشخیص پروتئین هدف | مشاهده فلورسانس، وسترن بلات/الایزا | 1-3 |
ما circRNA پروتئین فلورسنت سبز افزایش یافته (eGFP circRNA)، mCherry circRNA، لوسیفراز circRNA را به سلول های 293T ترانسفکت کردیم و پروتئین هدف را از طریق فلورسانس، فلورسنت یا سیگنال رنگی، وسترن بلات (WB)، سنجش ایمونوسوربنت متصل به آنزیم (ELISA) شناسایی کردیم.
سنجش قدرت مبتنی بر سلول نمونههای circRNA توسط Yaohai Bio-Pharma