آمادهسازی CircRNA نیازمند RNA خطی به عنوان ماده اولیه (RNA پیشنیاز) برای چرخهبندی است، که در آن RNA پیشنیاز معمولاً با استفاده از DNA پلاسمید خطی به عنوان الگوی ترانسکریپشن و ترانسکریپتیون در محیط بیرونی با کمک پلیمراز RNA T7 آماده میشود.
DNA پلاسمید با کیفیت بالا برای ترانسکریپشن در محیط بیرونی (IVT) ضروری است. بر اساس پلتفرم خدمات آمادهسازی پلاسمید پیشرفته، Yaohai Bio-Pharma میتواند خدمات آمادهسازی DNA پلاسمید خطی با دقت بالا و استاندارد (pDNA) را برای تضمین سلامت محصولات IVT ارائه دهد.
فرآیند | سرویس اختیاری | جزئیات خدمات | دوره تحویل (روز کاری) |
آمادهسازی پلاسمید دایرهای | 합성 ژن | 합성 ژن (سومین طرف) | ۷-۱۰ |
افزایش پلاسمید | افزایش پلاسمید | 2 | |
استخراج پلاسمید | |||
تهیه پلاسمید خطیسازی شده | خطیسازی و پاککردن پلاسمید | خطیسازی پلاسمید | 1 |
تصفیه دانهکار خطیسازی شده | |||
کنترل کیفیت DNA پلاسمید | Carthy گیتی | فوتومتر ماده Ultraviolet (UV) | ۱-۲ |
تصویربندی پلاسمید | الکتروفورز جل آگاروز (AGE) | ||
الکتروفورز کپیلری (CE)-اختیاری | |||
شناسایی پلاسمید | شناسایی انزیم محدودکننده / AGE |
انتخاب انعطاف پذیر روش های لینئاریزاسیون
بهینهسازی روشهای استخراج و تصفیه DNA برای دستیابی به نرخ بازیابی بالا.
معیارهای کنترل فرآیند سختگیرانه، با نرخ تراکم ابرپیچیده پلاسمیدها (برای مقاصد تحقیقاتی) بیش از 80%.
خدمات آمادهسازی و کنترل کیفیت پلاسمید با استاندارد بالا و کارایی بالا برای برآورده کردن نیازهای آزمایشگاهی.
با توجه به محصول Yaohai Bio-Pharma، mCherry circRNA، نسبت ابرپیچیده بخشی از نمونههای پلاسمید الگوی ترانسکریپتیون (برای مقاصد تحقیقاتی) بیش از 70% است، با نرخ خطیسازی نزدیک به 100%.
mCherry circRNA با استفاده از پلاسمید خطیسازیشده به عنوان الگو آماده میشود و در سلولهای 293T منتقل میشود. 24 ساعت پس از منتقلشدن، سطح بالای عبارت فلوئورسنت (فلوئورسنت قرمز) مشاهده میشود که پس از 48 ساعت افزایش مییابد و همچنان قابل تشخیص است در روز هفتم و چهاردهم پس از منتقلشدن.
پروتئین mCherry به طور پایدار و کارآمد بیان میشود و خلوص الگوی ترنسکریپتی میتواند نیازهای محصول دارویی circRNA با کیفیت بالا را برآورده کند.
اعتبارسنجی بیان درون زیستی circRNA mCherry