طبق عقیده مرکزی، RNA پیام رسان (mRNA) پلی برای انتقال مواد ژنتیکی از DNA به پروتئین ها است.
mRNA با کدگذاری پروتئین ها در داخل بدن، نقش بیولوژیکی ایفا می کند و mRNA بالغ در موجودات یوکاریوتی از پنج جزء تشکیل شده است: 5' Cap (ساختار کلاهک)، 5' UTR (منطقه غیر کدکننده)، ORF (قاب خواندن باز)، 3' UTR. و 3' دم polyA (دم پلی ادنیلات).
جزئیات خدمات
| روند | خدمات اختیاری | جزئیات خدمات | مدت تحویل (روز) |
| طراحی و بهینه سازی توالی mRNA | طراحی و بهینه سازی توالی کدنویسی | هم ترازی توالی CDS بهینه سازی کدون CDS | 1 |
| طراحی و بهینه سازی توالی های غیر کد کننده | طراحی و بهینه سازی توالی 5' UTR طراحی و بهینه سازی توالی 3' UTR طراحی و بهینه سازی توالی polyA | 1-2 |
گزینه های قابل تنظیم
| 5' UTR/3' UTR | - توالی UTR طبیعت
- توالی UTR جهش یافته/مهندسی
|
| 3' PolyA Tail | - دم 100 تا 120 آمپر (توصیه می شود)
- دم polyA قطعه بندی شده
- دیگر دم سفارشی
|
استراتژی های رایج برای طراحی توالی mRNA
| اجزای mRNA | توابع بیولوژیکی | استراتژی های بهینه سازی |
| 5' کلاه | mRNA را از تخریب توسط اگزونوکلئازها محافظت کنید و در هماهنگی با دم polyA در انتهای 3'، پروتئین اتصال دهنده polyA و پروتئین فاکتور شروع ترجمه برای شروع ترجمه پروتئین عمل کنید. | ساختار طبیعی Cap1 از گیرنده‌های تشخیص الگو اجتناب می‌کند و بنابراین پاسخ ایمنی طبیعی را کاهش می‌دهد، که می‌توان با رونویسی یک مرحله‌ای یا درپوش آنزیمی دو مرحله‌ای [برای جزئیات بیشتر به پوشش ic آنزیمی mRNA و پوشش هم‌رونویسی مراجعه کنید]. |
| 5' UTR | 5' UTR می تواند توسط ریبوزوم ها شناسایی شود، ترجمه mRNA را تنظیم کرده و بر پایداری mRNA تاثیر می گذارد. | حاوی توالی کوزاک بدون ساختار ثانویه بسیار پایدار است. UTRهای طبیعی ژنهای با بیان بالا برای mRNAهای رونویسی آزمایشگاهی (IVT) مانند α-گلوبین و β-گلوبین ترجیح داده می شوند. |
| CDS | مناطق کد کننده پروتئین و توالی های کد کننده آنتی ژن ها، آنتی بادی ها یا سایر پروتئین های کاربردی. | بهینه‌سازی کدون سطح ترجمه را افزایش می‌دهد، با توجه به اینکه کدون‌های غیربهینه خاصی ممکن است در تاخوردگی پروتئین نقش داشته باشند. |
| 3' UTR | ترجمه و پایداری mRNA را تنظیم می کند. | UTRهای طبیعی ژنهای با بیان بالا برای mRNAهای IVT مانند α-گلوبین و β-گلوبین ترجیح داده می شوند. |
| 3' دم polyA | تنظیم بیان پروتئین و محافظت از ساختار کلاهک از تخریب. | طول کافی (100-150 جفت باز) مورد نیاز است. رمزگذاری دم polyA روی پلاسمید الگوی رونویسی طول دم polyA تعریف شده تری را تضمین می کند. |
ویژگی های ما
منابع متعدد از کتابخانه های UTR طبیعی و اصلاح شده بسیار بیان شده. استراتژی اصلاح UTR بالغ؛
- تیم بهینه سازی CDS پیشرفته
برای تکمیل بهینه سازی کدون ها با یک تیم حرفه ای الگوریتم هوش مصنوعی همکاری کنید.
برای کنترل دقیق تر طول mRNA، توالی های polyA را مطابق با الگوهای DNA اضافه کنید.
- ترکیب های بهینه سازی متنوع
دستیابی به بیان کارآمد mRNA با ایمنی زایی کم.
بررسی موردی
طراحی توالی یک mRNA با گزارشگر دوگانه: mRNA mCherry-eGFP
سرویس mRNA Yaohai Bio-Pharma با طراحی و بهینه‌سازی یک توالی پشت سر هم ژنی گزارشگر دوگانه، که به بیان مشترک ژنهای دوگانه دست می‌یابد، به ارتقاء خود ادامه می‌دهد.
با استفاده از یک معرف ترانسفکشن معمولی، mRNA ژن mCherry-eGFP توالی دوگانه ژنی به سلول های 293T ترانسفکت می شود و دو سیگنال فلورسنت mCherry (قرمز) و پروتئین فلورسنت سبز تقویت شده (eGFP) با بیان همزمان پس از 48 ساعت شناسایی می شوند. نمودار با رنگ زرد مشخص شده است.
بیان mRNA ژن mCherry-eGFP در سلول 293T
FA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
نه
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
AF
MS
BE
MK
UR
BN
