صفحه اصلی > RNA IVT > 합성 RNA سفارشی > سنتز mRNA سفارشی > پوشاندن آنزیمی mRNA
ماسک‌گذاری انتهای 5' در mRNA یک تغییرپذیری ضروری است. mRNAها با ساختارهای ماسک، به خصوص ساختارهای Cap1، کمک می‌کنند تا mRNAها از پاسخ‌های ایمنی ذاتی در بدن دور شوند و منجر به ترجمه کارآمد پروتئین شوند.
ماسک‌گذاری آنزیمی (روش دو مرحله‌ای) روش مرسوم ماسک‌گذاری mRNA است، مشابه فرآیند ماسک‌گذاری در سازواران یوکاریوت. تحت تأثیر یک سری از آنزیم‌ها، گوانین 7-متیل (m7G) به انتهای 5' mRNA از طریق یک پیوند فسفات سه‌گانه 5'-5' متصل می‌شود و تغییرات متیل‌بندی را تجربه می‌کند تا به ساختار ماسک Cap 1 (m7GpppN) تبدیل شود.
نمودار فرماسی ساختار ماسک طبیعی
جریان واکنش ماسک‌گذاری آنزیمی به شرح زیر است:
دی ان ای پلاسمید خطی‌شده به عنوان الگو برای ترنسکریپسیون در محیط بیرونی سلول (IVT) در حضور پلیمراز T7 استفاده می‌شود، و آر ام این با ساختار کاپ انتهای 5' پس از تصفیه یک مرحله‌ای با استفاده از آنزیم کاپینگ وکسینیا و متیلترانسفراز 2'-O-متیل تشکیل می‌شود.
سرویس اختیاری |
جزئیات خدمات |
مدت زمان تحویل (روز) |
پوشاندن آنزیمی mRNA |
واکنش کاپینگ آنزیماتیک |
1 |
بهینه‌سازی واکنش کاپینگ - اختیاری |
طراحی و بهینه‌سازی مولفه‌های واکنش |
3~7 |
مولفه واکنش کاپینگ بهینه شده است و تولید ترانسکریپت آر ام این به طور قابل توجهی افزایش یافته است.
آر ان ام پی شده با قابضه به سلول های 293T تزریق می شود و بیان پروتئین هدف قابل تشخیص است.
با کنترل دقیق RNase در محیط آزمایشی و مصرفی، تخریب آر ان ام پیشگیری می شود.
پلتفرم آر ان ام شرکت Yaohai Bio-Pharma فرآیند کاملی برای واکنش قابضه سازی ایجاد کرده است.
برای آر ان ام eGFP، که محصول پیش آماده ای از قابضه سازی انزیمی است، سیگنال فلوئورسنت eGFP (فلوئورسنس سبز) در سطح بالا پس از تزریق به سلول های 293T برای 24 ساعت مشاهده می شود که توسط Western Blot (WB) آشکار شده است. این نشان می دهد که پروتئین هدف، پروتئین فلوئورسنت سبز تقویت شده (eGFP)، می تواند به طور کارآمد در محیط بیرونی سلول بیان شود.
بیان آر ان ام eGFP قابضه شده انزیمی در سلول 293T
یائوهای بیو-فارما در طول ۱۴ سال گذشته بر روی راهحلهای میکروبی CRDMO تمرکز کرده است. ما خدمات یکپارچه بیولوژیکی برای مشتریان در سراسر جهان ارائه میدهیم.
No. 801, Jiankang Avenue, Taizhou, Jiangsu, China
Copyright © Yaohai Biopharmaceutical Co., Ltd. All Rights Reserved | سیاست حریم خصوصی
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN