MRNA خودتکثیر (saRNA) که به آن RNA رپلیکون نیز گفته میشود، دنبالههای mRNA ترانسکریپتیون in vitro (IVT) و ژنهای رپلیکاز ویروسی مشتق شده از آلファویروس یا فلافیروسها را کد میکند. ژنهای رپلیکاز ویروسی به خودتکثیر mRNA میانجامد که این موضوع منجر به افزایش عبارت پروتئین و حداقل کردن مقدار مورد نیاز RNA نسبت به mRNAs غیرتکثیری میشود. جنبه دیگر این است که saRNA یک مولکول نسبتاً بزرگ (بیش از 14 کیلوبیت) است.
یائوهای بیو-فارما مجموعهای از فناوریهای ترکیب mRNA را برای ارائه mRNA غیر قابل افزایش و mRNA خود قابل افزایش (1000 nt~14000 nt) ایجاد کرده است، مانند طراحی و بهینهسازی دنباله، IVT، پاکسازی، خشککردن و جوشاندن در ذرات نانوی چربی (LNP). تمام محصولات تحت استانداردهای کنترل کیفیت شدید منتشر میشوند.
شکل 1. ویژگیهای ساختاری mRNAهای IVT: مرسوم، دایرهای و خود قابل افزایش.
RNA خود تقویت کننده شامل چهار پروتئین غیرساختاری (که به عنوان nsP1، nsP2، nsP3 و nsP4 مشخص شدهاند) است که از آلفاویروسها، ویروس آنسفالیت اسبی ونزوئلا (VEEV) مشتق شدهاند. در میان اینها، nsP1 فعالیتهای آنزیمی دوگانه GTase و N7MTase را نشان میدهد، در حالی که nsP2 فعالیت RTPase را دارد که برای سرپوشیدن mRNA IVT و تولید ساختار Cap 0 حیاتی است. علاوه بر این، nsP2 به عنوان پروتئاز و هلیکاز عمل میکند و پردازش پیچیده کل مختلط nsP را تسهیل میکند. تابع دقیق nsP3 هنوز مشخص نیست، اما با پروتئینهای مختلف سلول میزبان تعامل دارد و در نتیجه به کاهش پاسخ ضد ویروسی میزبان کمک میکند.
منطقه تحریککننده زیرژنووم آلفاویروس (SGP) قبل از ژن مورد علاقه (GOI) قرار دارد. عناصر SGP آغاز تراگنجایی GOI را با گذر از خواندن دنبالهای که پروتئینهای غیرساختاری ویروسی nsP را کد میکند، تسهیل میکند.
شکل 2: 합ت و آزمایشهای سلولی saRNA eGFP از Platform RNASci Yaohai Bio-Pharma.
پروتکل ترکیب saRNA مشابه mRNA است: سنتز mRNA سفارشی