CircRNA valmistamiseks on tsükliseerimiseks vaja lineaarset RNA-d prekursormaterjalina (RNA prekursor), kusjuures RNA prekursor valmistatakse tavaliselt lineariseeritud plasmiidse DNA-ga transkriptsioonimatriitsina ja transkribeeritakse in vitro T7 RNA polümeraasi abil.
Kvaliteetne plasmiidne DNA on in vitro transkriptsiooni (IVT) jaoks hädavajalik. Tuginedes küpsele plasmiidide ettevalmistamise teenuseplatvormile, suudab Yaohai Bio-Pharma pakkuda kõrge puhtusastmega ja standardset lineariseeritud plasmiidi DNA (pDNA) ettevalmistusteenust, et tagada IVT toodete terviklikkus.
Teenuste üksikasjad
| Protsess | Valikuline teenus | Teenuse üksikasjad | Tarneaeg (tööpäev) |
| Tsirkulaarse plasmiidi valmistamine | Geenide süntees | Geenide süntees (kolmanda osapoole) | 7-10 |
| Plasmiidi võimendamine | Plasmiidi võimendamine | 2 |
| Plasmiidi ekstraheerimine |
| Lineariseeritud plasmiidi valmistamine | Plasmiidi lineariseerimine ja puhastamine | Plasmiidi lineariseerimine | 1 |
| Lineariseerimine DNA puhastamine |
| Plasmiidse DNA kvaliteedi kontroll | Kontsentratsiooni puhtus | Ultraviolett (UV) spektrofotomeetria | 1-2 |
| Plasmiidi konformatsioon | Agaroosgeelelektroforees (AGE) |
| Kapillaarelektroforees (CE) - valikuline |
| Plasmiid tuvastada | Restriktsiooniensüümi identifitseerimine/ AGE |
Meie funktsioonid
- Freecut Template Plasmiid
Lineariseerimismeetodite paindlik valik
DNA ekstraheerimis- ja puhastamismeetodite optimeerimine kõrge taaskasutamise määra saavutamiseks.
Ranged protsessikontrolli standardid, plasmiidiproovide superhelikaalne konformatsioonimäär uuringu jaoks on üle 80%.
Kõrgetasemelised ja tõhusad plasmiidide ettevalmistamise ja kvaliteedikontrolli teenused, mis vastavad eksperimentaalsetele vajadustele.
Juhtumiuuring
Võttes näiteks Yaohai Bio-Pharma toote mCherry circRNA, on transkriptsioonimatriitsi plasmiidiproovide superkeerdunud suhe (uurimisaste) üle 70%, lineariseerimismäär on peaaegu 100%.
mCherry circRNA valmistatakse lineariseeritud plasmiidiga matriitsina ja transfekteeritakse 293T rakkudesse. Fluorestsentsi ekspressiooni kõrge tase (punane fluorestsents) tuvastatakse pärast 24-tunnist transfektsiooni, mis tugevneb 48 tunni pärast ja seda saab tuvastada ka 7. ja 14. päeval pärast transfektsiooni.
mCherry valk ekspresseerub stabiilselt ja tõhusalt ning transkriptsiooni malli puhtus vastab kõrge kvaliteediga tsirkRNA ravimitoote (DP) nõuetele.
mCherry circRNA in vitro ekspressiooni valideerimine
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
