5'-otsa piiramine on mRNA oluline modifikatsioon. Cap-struktuuridega mRNA-d, eriti Cap1 struktuurid, hõlbustavad mRNA-de vältimist kaasasündinud immuunvastusest in vivo, mille tulemuseks on tõhus valgu translatsioon.
Ensümaatiline piiramine (kaheetapiline meetod) on mRNA piiramise tavapärane meetod, mis sarnaneb eukarüootsete organismide korkimisprotsessiga. Ensüümide seeria toimel seotakse 7-metüülguaniin (m7G) mRNA 5'-otsaga 5'-5' trifosfaatsideme kaudu ja läbib metüülimise modifikatsiooni, moodustades katte struktuuri Cap 1 (m7GpppN).
Loodusliku kübarastruktuuri kujunemise skeem
Ensümaatilise korkimise reaktsiooni voog on järgmine:
Lineariseeritud plasmiidset DNA-d kasutatakse matriitsina in vitro transkriptsiooniks (IVT) T7 polümeraasi juuresolekul ning 5'-otsakorgi struktuuriga mRNA moodustub pärast üheastmelist puhastamist, kasutades vaktsiinia piiravat ensüümi ja 2'-O. -metüültransferaas.
Teenuste üksikasjad
Valikuline teenus | Teenuse üksikasjad | Tarneperiood (päev) |
mRNA ensümaatiline piiramine | Ensümaatiline korkimise reaktsioon | 1 |
Korgireaktsiooni optimeerimine – valikuline | Reaktsioonikomponentide projekteerimine ja optimeerimine | 3 ~ 7 |
Meie funktsioonid
- Korkimisreaktsiooni komponendi projekteerimine ja optimeerimine
Korkimisreaktsiooni komponent on optimeeritud ja mRNA transkripti tootmine suureneb oluliselt.
- In vitro ekspressiooni kontrollimine
Korgiga kaetud mRNA transfekteeritakse 293T rakkudesse ja sihtvalgu ekspressiooni saab tuvastada.
RNasesoni katsekeskkonna ja tarbekaupade range kontrolliga välditakse tõhusalt mRNA lagunemist.
Juhtumiuuring
Yaohai Bio-Pharma mRNA platvorm on loonud täiusliku korkimisreaktsiooni protsessi.
eGFP mRNA puhul, mis on ensümaatilise korkimisega valmistatud mRNA eelprodukt, võib pärast 293T-rakkude 24-tunnist transfekteerimist jälgida kõrgel tasemel eGFP fluorestsentssignaali (roheline fluorestsents), mis tuvastatakse Western Blot'iga (WB), mis näitab, et sihtvalguga täiustatud rohelist fluorestseeruvat valku (eGFP) saab tõhusalt ekspresseerida in vitro.
Ensümaatilise korgiga eGFP mRNA ekspressioon 293T rakus
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
