Kapseldamise aluseks on tarnesüsteemi projekteerimine ja arendamine. Hästi läbimõeldud manustamissüsteem võimaldab tsircRNA molekulidel siseneda kehasse ilma RNA ensüümide poolt lagunemata ja seejärel tõhusalt sihtkohta toimetada, läbida rakumembraani ja vabaneda rakusiseselt.
Lipiidide nanoosakesed (LNP-d) on parim saadaolev kohaletoimetamissüsteem, millel on eelised kapseldamises, in vivo ekspressioonis ja in vivo ohutuses võrreldes teiste kohaletoimetamissüsteemidega. Nukleiinhappefragmentidega LNP-d neelatakse kergesti rakkudesse ja moodustavad rakusiseseid kehasid. Pärast rakku sisenemist rakusisese keha happeline keskkond protoneerib ja laeb positiivselt ioniseeritud lipiidi pea, sulandudes seega rakusisese keha sisemembraaniga ja vabastades rakku sihtnukleiinhappe tegevuseks.
Yaohai Bio-Pharma tsirRNA teenus paraneb jätkuvalt ja võib pakkuda circRNA-LNP kapseldamise teenust, et optimeerida asjakohaseid kriitilisi protsessi parameetreid ning parandada tsirRNA ravimite tootmise järjepidevust ja reprodutseeritavust.
Protsess | Teenuse üksikasjad | Tarneperiood (päev) | Saavutused |
tsircRNA-LNP kapseldamine | Materjali ja vedeliku eeltöötlus | 2 | tsirkRNA-LNP ravimtoode (DP) |
Mikrofluidse seadme segamine | |||
Tangentsiaalne voolu filtreerimine | 1 | ||
Steriliseeriv filtreerimine | |||
circRNA-LNP kvaliteedikontroll | Kapseldamise efektiivsus | 1 | Test Report |
Osakeste suurus ja polüdisperssuse indeks | |||
Zeta potentsiaal |
Kiire süntees, kõrge teadus- ja arendustegevuse efektiivsus ning eelnevalt optimeeritud lahendused;
Kapseldamise suhe võib ulatuda üle 90%;
Lipiidide nanoosakeste suurust saab kontrollida vedeliku sissepritse kiiruse ja suhte muutmisega;
tsircRNA-LNP tooted valideeritakse raku in vitro ekspressiooniga ja need võivad sihtvalku tõhusalt ekspresseerida.
Valmistatakse ette LNP-eGFP tsirkRNA proovid ja nende erinevad annused (1 ug, 2 ug ja 4 ug) transfekteeritakse otse 293T rakkudesse, et kontrollida, kas nad suudavad sihtvalku ekspresseerida. Pärast 48-tunnist transfektsiooni võib täheldada selget fluorestsentssignaali ja fluorestsentsi intensiivsust suurendavat annust.
Lipo-circ_eGFP, mis koosneb liposoomist ja kapseldamata eGFP tsirRNA-st, võetakse kontrollina.