Seoses RNA prekursorite partiide valmistamisega on tavaliselt kasutatav meetod in vitro transkriptsioon (IVT). IVT reaktsioonis kasutatakse T7 promootorit sisaldavat lineariseeritud plasmiidset DNA-d matriitsina ja sünteesitakse T7 RNA polümeraasi juuresolekul substraadina RNA prekursor, mille substraadiks on nukleosiidtrifosfaadid (NTP-d).
In vitro tsüklistamise meetodid hõlmavad keemilist ligeerimist, ensümaatilist ligeerimist ja permuteeritud intron-eksoni (PIE) meetodit. Lühemate RNA-de tsükliseerimiseks sobivad keemiline ligeerimine ja ensümaatiline ligeerimine. Kui fragment on suurem kui 100 nt, väheneb tsüklistamise kiirus oluliselt. Seevastu PIE-süsteemil põhinev nukleaasimeetod võib saavutada 8 kb pikkuste järjestuste tsükliseerimise.
Guanosiintrifosfaadi (GTP) katalüüsi all läbib PIE struktuur ekstraintroni järjestuste tsükliseerimise. Koos mõistliku tsükliseerimiskiiruse suurendamise strateegiaga võib Yaohai Bio-Pharma saavutada kuni 4 kb järjestuste tsükliseerimise, mille tsükliseerimise efektiivsus on üle 80%.
RNA in vitro tsükliseerimisreaktsioon kulgeb järgmiselt:
RNA prekursor sünteesitakse in vitro transkriptsiooni teel ja PIE komponent viib GTP katalüüsi all lõpule isesplaissimise, moodustades tsirkulRNA.
Teenuste üksikasjad
| Protsess | Teenuse üksikasjad | Tarneaeg (tööpäev) |
| In vitro transkriptsioon ja tsirkulatsioon | Reaktsioonisüsteemi kinnitus | 1-2 |
| In vitro transkriptsiooni- ja tsüklistamisreaktsioonid |
| RNaasi R seedimine |
| Reaktsiooni optimeerimine | Reaktsiooni koostis, aja optimeerimine | 2-5 |
Meie funktsioonid
- Range testi kavandamine ja optimeerimine
Võib saavutada kuni 4 kb RNA tsükliseerimist.
- Kõrge tsüklistamise efektiivsus
Ratsionaalse järjestuse optimeerimise strateegia abil on võimalik saavutada üle 80% tsükliseerimise määra.
RNaaside range kontrolliga katsekeskkonnas ja tarbekaupades on RNA lagunemine tõhusalt ära hoitud.
Juhtumiuuring
In vitro tsüklistamine ja tsirkRNA rikastamine
PIE-süsteemi põhjal on Yaohai Bio-Pharma optimeerinud tsirkulaarse RNA järjestuse, mille tsüklistamismäär agaroosgeelelektroforeesi (AGE) abil on üle 80%. Kasutades RNaas R-d tsircRNA rikastamiseks, näitavad E-geelelektroforeesi tulemused, et lineaarne RNA prekursor lagundatakse ja pärast edasist puhastamist saab suurema osa täkkega tsirRNA-st eemaldada. Puhastuslahuse on ise välja töötanud Yaohai Bio-Pharma.
In vitro tsirkulatsioon ja tsirkRNA rikastamine
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
