Yaohai Bio-Pharma valmistab PIE-süsteemil (eksonite ja intronite joondamine) põhinevat tsirkulaarset RNA-d, mis tugineb RNA tsükliseerimise saavutamiseks I tüüpi intronite isesplaisingu funktsioonile. PIE struktuur on kujundatud T4 td geeni või kala tRNA prekursorgeeni abil ja paigutus on järgmine:
RNA intron ja toetav eksoni fragment jagunevad kaheks osaks (5'-terminaalne ja 3'-terminaalne), kus 5'-terminaalne järjestus kantakse üle sihtjärjestuse sabasse, 3'-terminaalne järjestus sisestatakse järjestuse esiossa. sihtjärjestus ja sihtmärkgeeni järjestus sisestatakse keskele.
GTP katalüüsi all viib PIE struktuur teiste järjestuste peale intronite tsükliseerumiseni. Koos mõistliku tsükliseerimiskiiruse suurendamise strateegiaga suudab Yaohai Bio-Pharma saavutada kuni 4 kb suuruste järjestuste tsükliseerimise tsükliseerimismääraga üle 80%.
Joonis 1. TsircRNA in vitro tsirkulatsioon PIE süsteemi alusel
Teenuste üksikasjad
| Protsess | Valikuline teenus | Teenuse üksikasjad | Tarneaeg (tööpäev) |
| tsircRNA järjestuse kujundamine ja optimeerimine | Kodeerimisjärjestuste kavandamine ja optimeerimine | CDS-järjestuse joondamine CDS koodoni optimeerimine | 1 |
| Mittekodeerivate järjestuste kujundamine ja optimeerimine | Introni- ja eksonijärjestuse kujundamine ja optimeerimine Homoloogse käe järjestuse kujundamine ja optimeerimine Vahetükkide järjestuse kujundamine ja optimeerimine | 1-2 |
mRNA järjestuse kujundamise ühised strateegiad
| CircRNA komponendid | Bioloogilised funktsioonid | Optimeerimisstrateegiad |
| Kaheotsalised introni- ja eksonijärjestused | GTP-katalüüsitud introni isesplaissimine järjestuste tsükliseerimiseks väljaspool introni. | Disainitud T4 td geeni või kalaõli tRNA prekursorgeeni järgi. |
| Kodeerimine | IRES | Sisemine ribosoomi äratundmissait, mis reguleerib tsirkRNA translatsiooni. | Erinevatest viirusallikatest, nt EMCV, CVB3 allikatest, pärinevate sisemise ribosoomi sisenemiskoha (IRES) järjestuste sõelumine. |
| CDS | Valku kodeerivad piirkonnad, järjestused, mis kodeerivad antigeene, antikehi või muid funktsionaalseid valke. | Koodoni optimeerimine tõstab tõlke taset; teatud mitteoptimaalsed koodonid võivad mängida rolli valgu voltimisel. |
| Mittekodeerimine | Mittekodeerivad järjestused | Geenide või valkude reguleerimiseks sihtige miRNA-sid või valke. | Spetsiifiliste miRNA-de või valkude sidumissaitide sihtimine võib sidumissaidi järjestusi korrata. |
Meie funktsioonid
- Optimeeritud PIE tsüklistamissüsteem Kombinatsioon mõistlike optimeerimisstrateegiatega, et saavutada üle 80% tsüklistamismäär;
- Tipptasemel CDS-i optimeerimismeeskond Koostöö professionaalse AI-algoritmimeeskonnaga CDS-i piirkonna koodonite optimeerimise lõpuleviimiseks;
- Küpse ja täiusliku protsessi tsirkRNA saab saavutada kõrge tsüklistamise efektiivsuse, kõrge stabiilsuse ja kõrge translatsiooniefektiivsusega.
Juhtumiuuring
Yaohai Bio-Pharma tõi turule kontrolltoote täiustatud rohelise fluorestsentsvalgu (eGFP) tsirRNA, mis põhineb PIE-süsteemil, et saavutada RNA tsükliseerimine.
Tavalise transfektsioonireagendi abil transfekteeritakse eGFP tsircRNA 293T rakkudesse ja eGFP (roheline) fluorestsentssignaali saab tuvastada 24 tunni pärast, mis tugevneb 48 tunni pärast. Fluorestsentssignaali saab tuvastada veel 7. päeval ja 14. päeval pärast seda. transfektsioon.
eGFP tsirkRNA in vitro ekspressiooni valideerimine
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
