In vitro tsükliseerimise ja RNaasi R rikastamisega saadud saadused tuleb in vitro transkriptsioonist (IVT) täiendavalt eemaldada, sealhulgas tsükliseerimisreaktsioonis kasutamata substraadid, reaktsiooni kõrvalsaadused ja täkkega RNA.
Yaohai Bio-Pharmal on küps LiCl sadestamine, magnethelmeste puhastamine, enda väljatöötatud puhastus ja muud mitmekesised puhastuslahendused, et tõhusalt eemaldada mitmesuguseid lisandeid ja valmistada väga puhast tsirkul-RNA-d.
Puhastuslahus väikeste koguste tsirkRNA jaoks rakkude transfektsiooniks ja loomkatsete osana.
Puhastuslahus väikeste koguste tsirkRNA jaoks rakkude transfektsiooniks ja loomkatsete osana.
Kõrgema kvaliteediga rakendusstsenaariumid;
Stabiilne ja skaleeritav puhastusprotsess GMP tootmisnõuete täitmiseks.
Protsess | Valikuline teenus | Teenuse üksikasjad | Tarneperiood (päev) | Saavutused |
tsirkulRNA puhastamine | Tavaline puhastuslahus | Liitiumkloriidi sadestamine | 1 | tsirkRNA ravimaine |
Magnethelmeste puhastamine | ||||
Väga puhas tsirkRNA puhastamine | Preparatiivne kõrgjõudlusega vedelikkromatograafia (HPLC) | 1-2 | ||
Puhvri vahetus | Ultrafiltratsioon | 1 | ||
tsirkRNA kvaliteedi kontroll | Kontsentreerimine / puhastamine | Ultraviolett (UV) spektrofotomeetria | 0.5 | Testi tulemused |
Puhtus | Agaroosgeelelektroforees (AGE)/E-geel | |||
HPLC-valikuline | 1 |
Rakendusstsenaariume on võimalik saavutada.
tsirkRNA puhtusega üle 90%;
RNaaside range kontrolliga katsekeskkonnas ja tarbekaupades on RNA lagunemine tõhusalt ära hoitud.
Yaohai Bio-Pharma on loonud küpse tsirkulRNA puhastuslahuse, mis suudab tõhusalt eemaldada mitmesuguseid protsessiga seotud lisandeid.
Tavalise lahusega puhastatud tsirkulaarsed RNA saadused on endiselt ilmselgelt segatud RNA ja intronitega.
Pärast Yaohai Bio-Pharma väljatöötatud puhastuslahust saab edukalt eemaldada mitmesuguseid lineaarseid RNA lisandeid, nagu täkkega RNA ja intronid.
tsircRNA ekspressiooni valideerimine
Kasutades tavapärast liposoomi, transfekteeritakse puhastatud eGFP tsirRNA 293T rakkudesse ja fluorestsentssignaali täheldatakse 24 tunni pärast ja seda suurendatakse jätkuvalt 48 tunni pärast. Fluorestsentssignaali saab tuvastada veel 7. ja 14. päeval pärast transfektsiooni.