Rakupõhised tugevusanalüüsid
mRNA potentsiaalianalüüsi tähtsus
MRNA vaktsiinide ja ravimite kiire arenguga on vaja spetsiifilist analüüsimeetodite paneeli, et testida tugevust (määrates nende bioloogilist aktiivsust), mis hõlmab mRNA translatsiooni efektiivsust. Need meetodid põhinevad tavaliselt rakkude transfektsioonil ja sihtvalgu funktsionaalsetel analüüsidel.
Yaohai Bio-Pharma pakub mRNA ravimainete või LNP-toodete rakupõhiseid potentsianalüüse, sealhulgas rakkude transfektsiooni (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 rakud jne) ja ELISA või Western Blotting (WB) analüüse.
Regulatiivsed nõuded tugevusanalüüsidele
Vastavalt WHO regulatiivsetele kaalutlustele: „Lõpliku vaktsiini iga partii tugevus tuleks määrata sobiva kvantitatiivse ja valideeritud funktsionaalse(te) meetodiga. Potentsiaalsed in vitro potentsiaalianalüüsid võivad hõlmata rakupõhiseid transfektsioonisüsteeme või rakuvabu teste. Ja USP soovitas "rakupõhist analüüsi", et testida mRNA tugevust, st sihtvalgu ekspressiooni.
Analüütiline meetod
|
Analüüs
|
Meetodid
|
|
Tugevuse analüüsid
|
Rakupõhine transfektsioon ja sihtvalk tuvastavad:
293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 rakud jne.
|
Menetlus
1. etapp. Rakupõhine transfektsioon mRNA või mRNA-LNP-ga
Rakke kasvatatakse ja transfekteeritakse mRNA või mRNA-LNP-ga. Üksikasjalikult transfekteeritakse mRNA pärast segamist transfektsioonireagendiga, samas kui mRNA-LNP transfekteeritakse otse rakkudesse. 24–48 tunni pärast puhastage ekspresseeritud valku sisaldav supernatant tsentrifuugimisega.
Etapp 2. Sihtvalgu funktsionaalsed testid
Tehke ELISA või WB analüüsid, et hinnata sihtvalkude funktsionaalset seondumist.
Juhtumiuuring
mRNA proovide rakupõhised tugevusanalüüsid
Yaohai-BioPharma on välja töötanud mRNA rakupõhise potentsianalüüsi meetodi, mis hõlmab rakukultuuri, rakkude transfektsiooni ja valkude funktsionaalseid analüüse. Transfekteerisime eGFP mRNA, mCherry mRNA, lutsiferaasi mRNA, spike valgu mRNA 293T rakkudesse ja tuvastasime sihtvalgu fluorestsentsi, luminestsents- või värvilise signaali, WB, ELISA kaudu.
Yaohai Bio-Pharma mRNA toodete rakupõhised tugevusanalüüsid
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
