Võrreldes kaheastmelise ensümaatilise piiramisega võib üheetapiline kaastranskriptsiooni piiramise meetod protsessi voolu oluliselt vähendada. Meetod on tulemusele orienteeritud ja hõlmab cap-analoogide lisamist in vitro transkriptsiooni (IVT) reaktsioonile. Cap analooge saab sisestada transkriptsiooni alguses ja cap struktuuriga mRNA saab pärast transkriptsiooni lõpetamist. Praegused kolmanda põlvkonna korgi analoogid võivad vältida pöördkorkimist ja lisada otse transkriptsioonitootele Cap 1 struktuuri.
MRNA in vivo immunogeensuse ja translatsiooni efektiivsuse kaalutlustel kasutatakse IVT protsessis sageli teatud tüüpi modifitseeritud NTP-sid ja tavalised modifitseeritud nukleotiidid on pseudouridiin (Ψ), N1-metüül-pseudouridiin (N1Ψ) ja 5-metüültsütosiin (5mC). .
Joonis: mRNA ko-transkriptsiooni ja korkimisreaktsiooni skeem
Teenuse üksikasjad
Teenus | Teenuse üksikasjad | Tarneaeg (tööpäev) |
Kaastranskriptsiooni piiramine | In vitro transkriptsioonivastus (Clean Cap analoog) | 1-2 |
| Nukleotiidide modifikatsioonid (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| DNA matriitsi eemaldamine (DNaas I) |
IVT tingimuste optimeerimine – valikuline | Reaktsioonikomponentide projekteerimine ja optimeerimine | 3-7 |
Meie funktsioonid
- Mitmekesised nukleotiidide muutmise strateegiad
Valgu ekspressiooni võivad parandada mitmed valikulised nukleotiidide modifitseerimise strateegiad.
- Optimeeritud reaktsioonisüsteem
Saavutage kõrge transkriptsioonisuhe ja kõrge piiritlemise efektiivsus.
- Stabiilne korkimisprotsess
Saavutage üle 95% piirmäära.
Vältige tõhusalt mRNA lagunemist, kontrollides rangelt RNaasi katsekeskkonnas ja tarbekaupades.
Juhtumiuuring
Yaohai Bio-Pharma on loonud küpse kaastranskriptsiooni piiramisprotsessi platvormi, kasutades puhtaid korgi analooge, et lisada Cap1 struktuur otse, vältides samal ajal pöördkorkimist. Pärast standardiseeritud proovide eeltöötlust ja kapillaarelektroforeesi (CE) tuvastamist võib täiustatud rohelise fluorestseeruva valgu (eGFP) mRNA piiramiskiirus ulatuda üle 95%.
eGFP mRNA piiramise efektiivsus on üle 95%
Kotranskriptsioonilise korgiga valmistatud eGFP mRNA ja mCherry mRNA transfekteeritakse vastavalt 293T rakkudesse ja 48 tunni pärast täheldatakse tugevat fluorestsentssignaali, mis viitab sellele, et mRNA ekspresseerub tõhusalt 293T rakkudes.
eGFP mRNA ja mCherry mRNA ekspressioon 293T rakus
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
