Võrreldes kaheastmelise enzyymse kapimisega võib üheastmeline ko-transkriptsioonine kapimismeetod protsessi tugevalt lihtsustada. Meetod on tulemustegev ja hõlmab cap analoogide lisamist in vitro transkriptsiooni (IVT) reaktsioonile. Cap analoogid saavad lisatud olla juba transkriptsiooni alguses, ja pärast transkriptsiooni lõppu saab cap struktuuriga mRNAt. Praegused kolmanda põlvkonna cap analoogid võivad vältida pööratud kapimist ja lisada Cap 1 struktuuri otse transkriptsiooni tootele.
Arvestades mRNAd in vivo immunogeenseid omadusi ja tõlkkasvatuse efektiivsust, kasutatakse IVT protsessis sageli mõnda muundatud NTPd, ning levinud muundatud nukleotiidid on pseudouraciin (Ψ), N1-metyl-pseudouraciin (N1Ψ) ja 5-metüültsütoosiin (5mC).
Joonestus: mRNA Ko-transkriptsiooni ja Kapimisreaktsiooni Diagramm
Teenuste üksikasjad
Teenindus |
Teenuste üksikasjad |
Toimetamisaeg (tööpäev) |
Ko-transkriptsioonine kapimine |
In vitro transkriptsiooniline vastus (Clean Cap anaalog) |
1-2 |
| Nukleotiidmuutused (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| DNA malli eemaldamine (DNase I) |
IVT tingimuste optimeerimine - valikuline |
Reaktsiooni komponendi disain ja optimeerimine |
3-7 |
Meie omadused
- Mitmekesed nukleotiidimuutuste strateegiad
Mitmed valikulised nukleotiidimuutuste strateegiad võivad parandada proteiini ekspressiooni.
- Optimeeritud reaktsioonisüsteem
Saavuta kõrge transkriptsioonisuhe ja kõrge kapsleeffektiivsus.
- Stabiilne kapsleerimisprotsess
Saavuta kappimise kiirus üle 95%.
Effektiivselt takistage mRNAd hävimist, hoides eksperimentaalse keskkonna ja kulutamisvahendite RNase taset tihedalt kontrolli all.
Praktikunne
Yaohai Bio-Pharma on loonud tugeva kooskirjutamise käigus kappimise protsessiplatvormi, milles kasutatakse puhast cap analoogi, et lisada Cap1 struktuur otse ning vältida vastupidi kappimist. Pärast standardset näidispreatset ja kapillaairelektroforeesi (CE) tuvastamist võib täiendatud roheline fluoresentsne proteiini (eGFP) mRNA kappimise kiirus jõuda üle 95%.
eGFP mRNA kappimise efektiivsus üle 95%
Kooskirjutamise käigus kappitud eGFP mRNA ja mCherry mRNA transfeeritakse eraldiseisvalt 293T-seletesse ja peale 48 tundi vaadetakse tugevat fluoresentsset signaalit, mis näitab, et mRNA väljendub tõhusalt 293T-seletes.
EGFP mRNA ja mCherry mRNA väljendamine 293T-seles
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
