RNA eelstadiumite partii ettevalmistamise kohta kasutatakse tavaliselt meetodina in vitro transkriptsioon (IVT). IVT-reaktsioon kasutab lineaarset plasmid-DNA-t, mis sisaldab T7 promootori, mallina ning süntetiseerib RNA-eelse stadiumi T7 RNA-polimeerases olemasolus nukleosiid-trifosfaatide (NTP) kui substraatina.
In vitro tsüklisteerimismeetodid hõlmavad keemilist sidumist, enzyymset sidumist ja permuteeritud intron-eksoon (PIE) meetodit. Keemiline sidumine ja enzyymne sidumine sobivad lühemate RNAde tsüklisteerimiseks. Kui fragment on suurem kui 100 nt, väheneb tsüklisteerimise kiirus oluliselt. Vastupidi sellele võib nuklease meetod, mis põhineb PIE süsteemil, saavutada 8 kb pikkuse järjestuste tsüklisteerimise.
Guanosiintrifosfaatide (GTP) katalüüs all läbib PIE struktuur ekstrainsrooni järjestuste tsüklisteerimise. Ühendatunastrateegiaga, mis suurendab tsüklisteerimise kiirust, võib Yaohai Bio-Pharma saavutada kuni 4 kb pikkuse järjestuste tsüklisteerimise, mille tsüklisteerimise tõhusus on üle 80%.
RNA in vitro tsüklisteerimisreaktsioon toimub järgmiselt:
RNA eelpargi süntees toimub in vitro transkriptsiooniga, ja PIE komponent lõpetab GTP katalüüs all iseenda splicingu, et moodustada circRNA.
Teenuste üksikasjad
| Protsess |
Teenuste üksikasjad |
Toimetamisaeg (tööpäev) |
| In vitro transkriptsioon ja tsirkulatsioon |
Reaktsioonisüsteemi kinnitamine |
1-2 |
| In vitro transkriptsioon ja tsükliseerimisreaktsioonid |
| RNase R digeerimine |
| Reaktsiooni optimeerimine |
Reaktsiooni koostis, aja optimeerimine |
2-5 |
Meie omadused
- Range testi disain ja optimeerimine
Tehakse kuni 4 kb RNA tsüklisatsiooni.
- Kõrge tsüklisatsiooni tõhusus
Ratsionaalse järjestuse optimeerimise strateegiaga saab saavutada üle 80% tsüklisatsiooninormi.
Kaudselt kontrollides eksperimentaalkeskkonna ja tarbimisvarustuse RNaseid, takistatakse RNA degradatsiooni tõhusalt.
Praktikunne
In vitro tsüklisteerimine ja circRNA beregune
PIE süsteemi põhjal on Yaohai Bio-Pharma optimeerinud circRNA jada, kus tsüklisteerimise kiirus on agarosegelelektrofooruse (AGE) järgi üle 80%. RNase R abil circRNA beregune korraldades näitavad E-gelelektrofooruse tulemused, et lineaarne RNA eelkord on hävitatud ning edasise puhastuse järel saab enamik katki olnud circRNA eemaldada. Puhastussüsteem on arendatud Yaohai Bio-Pharma poolt ise.
In vitro tsüklisteerimine ja circRNA beregune
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
