Yaohai Bio-Pharma valmistab circRNA PIE süsteemi (eksoonide ja intronide joondamine) põhjal, mis tugineb tüübi I intronide iseenda splicingufunktsioonile RNA tsükkeldamiseks. PIE struktuur on kujundatud T4 td geeni või kalas tRNA eelsegeeni kasutades ning paigutus on järgmine:
RNA intron ja toetava eksoonipärased jagatakse kaheks osaks (5' terminal ja 3' terminal), kusjuures 5' terminaljada transponeeritakse sihtjada lõppu, 3' terminaljada sisestatakse sihtjada algusesse ja sihtgeenijada asetatakse keskele.
GTP katalüüs all viib PIE-struktuur juurde mitte-intronsete jadade tsükkeldamise. Tsükkeldamise kiiruse mõistliku parandamisstrateegia kombinatsiooniga saab Yaohai Bio-Pharma saavutada jadade tsükkeldamist kuni 4 kb pikkusega ning üle 80% tsükkeldamise kiirusega.
Joonis 1. circRNA in vitro tsüklite kitsendamine PIE-süsteemi alusel
Teenuste üksikasjad
| Protsess |
Valikuline teenus |
Teenuste üksikasjad |
Toimetamisaeg (tööpäev) |
| circRNA jada disain ja optimeerimine |
Koodivate jadade kujundamine ja optimeerimine |
CDS jada võrdlemine
CDS kodooni optimeerimine
|
1 |
| Mittekodeerivate jadade kujundamine ja optimeerimine |
Introni ja eksioni jada emitimine ja optimiseerimine
Homoloogsete armade jada emitimine ja optimiseerimine
Vahemiku jada emitimine ja optimiseerimine
|
1-2 |
Tavalised strateegiad mRNA jada disainimiseks
| CircRNA komponendid |
Bioloogilised funktsioonid |
Optimeerimisstrateegiad |
| Kahepoolelised intronid ja eksjonid |
GTP-katalüseeritud introni iseenda splicing puhul, et tsüklide välise jada. |
Kujundatud T4 td geeni või kalaõli tRNA eelsege järgi. |
| Kooder |
IRES |
Sisemine ribosoomi tuvastamise aken, mis juhib circRNA tõlkimist. |
Erinevate viiruseallikate (nt EMCV, CVB3) sisemiste ribosoomi sisseminemiseks sobivate jadade valimine. |
| CDS |
Proteiinide kooderivaadetega piirkonnad, jadad, mis koodivad antigeenide, antikehade või teiste funktsiooniliste proteiinide jaoks. |
Koonusoptimiseerimine suurendab tõlke tasemeid; mõned mitteoptimaalsed koonused võivad mängida rolli proteiini kaasamisel. |
| Mittekooder |
Mittekooderjadad |
Määramata miRNAd või proteiinid, et teostada geeni või proteiini reguleerimist. |
Spetsiifiliste sidumispunktide määratlemine miRNAde või proteiinide jaoks võib korduda sidumispunkti jadades. |
Meie omadused
- Optimeeritud PIE tsükkeldamissüsteem kombinatsiooniga ning mõistlikud optimeerimisstrateegiad, et saavutada tsüklitamise kiirus üle 80%;
- Tipp CDS Optimeerimismeeskonna koostöö professionaalse AI algoritmi meeskonnaga, et lõpetada CDS piirkonna kodoonide optimeerimine;
- Täiuslik ja täiuslik Protsess circRNA võib saavutada kõrge tsüklitamise efektiivsusega, kõrgema stabiilsusega ja kõrgema tõlkimise efektiivsusega.
Praktikunne
Yaohai Bio-Pharma esitas kontrolltoote tugevaks rohelise fluoresentsproteini (eGFP) circRNA, mis põhineb PIE süsteemil, et saavutada RNA tsüklitamine.
Tavalise transfeerimisreaagenti kasutamisel edastatakse eGFP circRNA 293T-sele, ja 24 tundi pärast on võimalik tuvastada eGFP (roheline) fluoresentsignaal, mis tugevdub 48 tundi pärast. Fluoresentsignaali on veel võimalik tuvastada 7. ja 14. päeval pärast transfeerimist.
EGFP circRNA in vitro väljendusvalideerimine
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
