Rakupõhised potentsiatestid
MRNA potentssianalüüsi tähtsus
MRNA vaktsiinide ja ravimite kiire arenguga on vaja spetsiifilist analüüsimeetodikogu, et testimaks potentsust (nende bioloogilise tegevuse määratlemine), mis hõlmab mRNA tõlgete effektiivsust. Need meetodid põhinevad tavaliselt rakutransfektsioonil ja sihtmolekuliga seotud funktsionaalsetel analüüsmeetoditel.
Yaohai Bio-Pharma pakub keelatud potentssianalüüse mRNA ravimainimestele või LNP toodetele, sealhulgas rakutransfektsiooni (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 rakud jne) ja ELISA või läbipõletusmeetod (WB) analüüs.
Potentssianalüüsile kehtivad nõuded
Kohaselt WHO regulatiivsetele kaalutlustele: "Iga vaktsiini lote jõudlus peaks olema määratletud sobiva ja valideeritud funktsionaalse meetodi abil. Potentsiaalsed in vitro jõudluse analüüsid võivad hõlmata rakupõhiseid transfeerimissüsteeme või rakuvahteta analüüse." USP soovitas kasutada "rakupõhist analüüsi" mRNA jõudluse testimiseks, st sihtproteini väljendamist.
Analüütiline meetod
|
Analüüs
|
Meetodid
|
|
Jõudluse analüüs
|
Rakupõhine transfeerimine ja sihtproteini identifitseerimine:
293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 rakud jne.
|
Menetlus
Samm 1. Rakupõhine transfeerimine mRNA-ga või mRNA-LNP-ga
Rakud kultiveeritakse ja transfeeritakse mRNA-ga või mRNA-LNP-ga. Lähemalt öeldes transfeeritakse mRNA transfeerimisreostega segatatud pärast, samas kui mRNA-LNP transfeeritakse otse rakkudele. Pärast 24-48 tundi centrifugeeritakse sisaldava väljendatud proteiini üleminek, et see selgetaks.
Samm 2. Sihtproteini funktsionaalsed analüüsid
Käivitage ELISA või WB-assaaid, et hinnata sihtproteenide funktsionaalset sidumist.
Praktikunne
Rakupõhised tugevusassaid mRNA näidistes
Yaohai-BioPharma on arendanud rakupõhise tugevusassai meetodi mRNA jaoks, mis hõlmab rakukultuurimist, rakuteavitamist ja proteiinifunktsionaalseid assaaid. Me teavitasime eGFP mRNA-d, mCherry mRNA-d, luciferase mRNA-d ja spiikiproteiini mRNA-d 293T rakkudega ning tuvastasime sihtproteiini fluoresentsia, lumesentsia või värvi signaalide, WB, ELISA abil.
Yaohai Bio-Pharma rakupõhised tugevusassaid mRNA toodetega
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
