Obsazení N-glykosylačního místa je fyziologickým rysem glykoproteinů a produkuje hlavně N-glykan. Služba analýzy obsazenosti N-glykosylačního místa společnosti Yaohai Bio-Pharma je prováděna prostřednictvím digesce, uvolňování, obohacení a analýzy pomocí kapalinové chromatografie-elektrosprejové ionizační hmotnostní spektrometrie-hmotnostní spektrometrie (LC-ESI-MS/MS).
Podíleli jsme se na proteinové strukturní charakterizaci různých velkých molekul, včetně rekombinantních podjednotkových vakcín, nanoprotilátek/VHH/jednodoménových protilátek (sdAbs), fragmentů protilátek, hormonů/peptidů, cytokinů, růstových faktorů (GF), enzymů, kolagenů, atd.
Regulační požadavky na obsazení místa N-glykosylace
Podle směrnice ICH Q6B se „u glykoproteinů stanovuje obsah sacharidů (neutrální cukry, aminocukry a kyseliny sialové). Kromě toho je v nejlepší možné míře analyzována struktura sacharidových řetězců, oligosacharidový vzor (antenární profil) a glykosylační místo (místa) polypeptidového řetězce.
Analytická metoda
| Analýza |
Metody |
| Obsazení N-glykosylačního místa |
LC-MS po štěpení deglykosylázou a proteázou |
postupy
1. Štěpení proteinů pro vytvoření malých peptidových fragmentů.
2. Uvolnění N-glykanu pomocí endoglykosidázy H nebo PNGázy F. Endoglykosidáza H štěpí vazbu mezi dvěma zbytky GlcNAc v jádru N-vázaných glykanů, zatímco PNGáza F je glykoamidáza, která přeruší vazbu mezi GlcNAc a Asn, čímž uvolní celý cukerný řetězec a přeměnu Asn na Asp s nárůstem hmotnosti o 1-Da.
3. Obohacení N-glykopeptidu pomocí HILIC (hydrofilní interakční kapalinová chromatografie)
4. Analýza obsazenosti N-vázaného glykosylačního místa pomocí LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
