Deamidace postranních řetězců glutaminu a asparaginu je běžnou modifikací z hlediska dopadu na vlastnosti proteinových biofarmak. V glutaminových zbytcích může dojít k deamidaci, ale obvykle mnohem nižší rychlostí. Rychlosti deamidace jsou ovlivněny teplotou, pH, lokální proteinovou strukturou a lemujícími aminoacylovými zbytky.
Yaohai BioPharma nabízí službu testování deamidace aminokyselin, která vám umožňuje detekovat deamidaci aminokyselin pomocí kapalinové chromatografie-hmotnostní spektrometrie (LC-MS).
Zapojili jsme se do proteinové strukturní charakterizace různých velkých molekul, včetně rekombinantních podjednotkových vakcín, nanoprotilátek/VHH/jednodoménových protilátek (sdAbs), fragmentů protilátek, hormonů/peptidů, cytokinů, růstových faktorů (CF), enzymů, kolagenů, atd.
Regulační požadavky na deamidaci aminokyselin
Podle pokynů ICH Q6B mohou být deamidované formy detekovány a charakterizovány chromatografickými, elektroforetickými a/nebo jinými relevantními analytickými metodami.
Analytické metody
| Analýza |
Metody |
| Deamidace |
Kapalinová chromatografie-hmotnostní spektrometrie (LC-MS) |
postupy
např. deamidace asparagové kyseliny
1. Enzymatické trávení
2. LC-MS za podmínek High-Performance Liquid Chromatography (HPLC).
3. Analýza dat
K deamidaci asparaginu dochází prostřednictvím sukcinimidového meziproduktu (Suc), který je citlivý na racemizaci a hydrolýzu, čímž se získají čtyři izomery Asp, včetně L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp a D-IsoAsp.
Teoreticky by deamidace Gin mohla generovat čtyři odpovídající izomery Glu prostřednictvím procesu podobného deamidaci Asn.
Hmotnostní spektrometrie s vysokým rozlišením snadno identifikuje 1-Da hmotnostní rozdíl mezi peptidy obsahujícími Asn/Gln a jejich odpovídajícími deamidovanými protějšky Asp/Glu.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
