Význam kmenového screeningu
Pro vývoj biologických CMC je nezbytný screening vhodných hostitelů, který určuje kvalitu a konzistenci produktu a výrobního procesu. Přímým cílem hostitelského screeningu je poskytnout kandidátní primární buněčnou banku (PCB) s vysokými úrovněmi exprese a vysokou stabilitou jak z hlediska stability pasáže, tak stability při skladování. Screening vhodného hostitele je nutný ze dvou hlavních důvodů:
- Nejprve vyberte mikrobiálního hostitele s vysokou úrovní exprese. Existuje mnoho komerčně dostupných kmenů, které se používají k expresi různých typů proteinů, jako jsou toxické proteiny, rozpustné proteiny nebo eukaryotické proteiny.
- Za druhé, prověřovat hostitele s genetickou stabilitou. Testování genetické stability je klíčovým bodem během životního cyklu výroby. Předpokládá se, že vysoká genetická stabilita je uznávána jako další klíčová charakteristika vhodného kmene.
Klíčová slova: selekce mikrobiálních kmenů, screening mikrobiálních kmenů, vysoce výkonný screening bakterií nebo kvasinek, screening vysoce produkčních kmenů, screening vysoce stabilních kmenů, screening geneticky stabilních kmenů Aplikace: humánní medicína, medicína zvířat, vakcína, syntetická biologie, rekombinantní velká molekula biologika, biologické činidlo
Kmenové screeningové služby Yaohai Bio-Pharma
S využitím více než 10 let zkušeností CDMO v mikrobiální biologii podporujeme vývoj a výrobu různých velkých molekul, včetně rekombinantních podjednotkových vakcín, viru podobných částic (VLP), hormonů (inzulín, GLP-1, růstový hormon), cytokinů ( Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), růstové faktory (EGF, FGF, NGF), nanoprotilátky/jednodoménové protilátky (sdAb), enzymy atd.
Nashromáždili jsme bohaté zkušenosti s výběrem různých typů plazmidových vektorů a mikrobiálních hostitelů, včetně bakterií Escherichia coli (E. coli), a kvasnice Pichia pastoris (P. pastoris), Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae), Hansenula polymorpha (H. polymorpha). Můžeme najít nejlepší expresní systém pro vaše jedinečné biologické látky.
Shromáždili jsme různé mikrobiální hostitele s jasnými zdroji a standardním CoA, včetně E. coli exprese a exprese kvasinek.
Podrobnosti služby
|
Služby
|
Podrobnosti služby
|
Minimální časová osa/den
|
Dodávky
|
|
Konstrukce kmene (E. coli)
|
Transformace plazmidu (multi-hostitelé)
|
5
|
COA komerčních hostitelů Zpráva o stavbě kmene
|
|
PCR ověření
|
|
Čištění kmene
|
|
Konzervace kmene
|
|
Konstrukce kmene (kvasinky)
|
Příprava kompetentních kvasinkových buněk
|
10
|
|
Linearizace plazmidu
|
|
Elektro transformace
|
|
Screening rezistence/nutričního nedostatku
|
|
Čištění kmene
|
|
Konzervace kmene
|
|
Vhodný screening hostitele
|
Extrakce plasmidové nebo genomové DNA
|
15-20
|
Proces screeningu hostitele COA umělých kmenů
|
|
PCR verifikace, štěpení restrikčními enzymy
|
|
Sekvenování cílových genů
|
|
Screening hostitelů s vysokou expresí
|
|
Screening hostitelů s genetickou stabilitou
|
|
Konzervace kmene
|
Případová studie
Vhodný hostitel zlepšuje hladinu exprese proteinu 2.5krát.
Jsme pověřeni vývojem vysoce produkčních E. coli kmen. A vyzkoušeli jsme tři druhy reklamy E. coli hostiteli, na základě charakteristik cílového proteinu. Ukázalo se, že kmeny S1-1 a S1-2 (obr. A: dráha 1,2) zlepšily hladinu proteinu na 3.5krát než původní kmen klienta (obr. A: dráha 3).
Kromě toho kmen S1-1 vykazoval vysokou genetickou stabilitu (obr. B) a byl rozpoznán jako kandidátní kmen pro primární buněčné bankovnictví (PCB).
Naše servisní funkce
Prokázané odborné znalosti s různými mikrobiálními hostiteli, např. E. coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; P. pastoris SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink kmen 1/2/3/4; S.cerevisiae si H. polymorpha.
Máme zkušenosti s E. coli periplazmatická sekrece, exprese rozpustných a inkluzních tělísek, stejně jako kvasinková intracelulární nebo sekreční exprese. Nepřidáváme žádná antibiotika nebo je přidáváme podle regulačních pokynů.
Zavádíme vysoce výkonnou screeningovou platformu pro screening vysoce produkujících a stabilních kmenů z více než stovky kandidátských kmenů.
Je zajištěno, že proces kmenového inženýrství a screeningu je sledovatelný v rámci Good Data and Record Management.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
