Význam vývoje procesu pro dolní tok (DSP)
Celé kvasné šťávy obsahují cílový protein nebo plazmid, stejně jako produktové a procesní im purity, například agregáty, mikrobiologické buněčné substráty, Proteiny Hostitelské Buňky (HCP), DNA Hostitelské Buňky (HCD), endotoxiny a antibiotika.
Proto je klíčové navrhnout efektivní DSP, proces čištění, který odstraní určité im purity a vyprodukuje vysoce čistou a vysokou kvalitu látky na léky. Navíc optimalizace procesu čištění může pomoci zvýšit účinnost produkce, snížit náklady a zlepšit škálovatelnost a reprodukovatelnost procesu.
Klíčová slova: vývoj procesu, optimalizace a validace, proces čištění, chromatografie, eliminace im purity, odstranění HCP, eliminace HCD, odstranění endotoxin, denaturace a refaldování proteinu, sestavení VLP, konjugace
Aplikace: biofarmaceutický průmysl, lékařská péče pro lidi, veterinární lékařství, vakcíny, rekombinované velkomolekulové biologické látky, rekombinované biologické látky, biologické reagenty
Řešení DSP od Yaohai Bio-Pharma
Máme rozsáhlé zkušenosti s izolací cílových bílkovin nebo plazmidů z komplexních matic vývojem a optimalizací procesu čištění na dolním proudu. Existují různé typy jednotlivých operací vhodných pro čištění biologických látek, včetně centrifugace, filtrace, homogenizace, alkalické lyzy, ultrafiltrace, sedimentace, denaturace bílkovin a jejich refaldování, chromatografie atd.
Naše dostupné služby v oblasti vývoje čištění zahrnují:
- Vývoj celého procesu čištění od sběru buněk nebo supernatanu po konečnou aktivní látku.
- Optimalizace procesu čištění na základě produktově a procesově souvisejících nečistot pro zvýšení kvality a bezpečnosti produktu, například HCP, HCD, endotoxiny.
- Definice a optimalizace klíčových parametrů v jedné nebo více operačních jednotkách, včetně lizy buněk, tangenciálního proudového filtrace, testování resiny, chromatografie, denaturování a refaldování bílkovin atd.
- Optimalizace procesu s ohledem na kvalitu, výnos, účinnost, náklady a škálovatelnost.
- Validace procesu dolního proudu čištění.
- Posouzení rozsahu parametrů na základě rizik a Návrh experimentů (DoE) v modelování procesu.
Detaily služby
Standardizované platformy pro čištění bílkovin nebo plazmidů jsou založeny na více hrubých krocích čištění a méně než 4 krocích chromatografie, včetně zachycování, mezistupňového čištění a dokončovacího čištění.
| Detaily služby |
Operační jednotky |
Parametry |
| Hrubé čištění |
Centrifugace |
Otáčky za minutu, Čas |
| Vysokotlaká homogenizace |
Celkový pevný obsah, tlak, cykly |
| Spojité alkalické lizy |
Poměr znovu zvedených buněk k liznímu roztoku, čas lizy |
| Tangenciální toková filtrace |
Materiál membrány a velikost por, rychlost přívodního toku, transmembránový tlak (TMP), poměr objemu filtrátu k ploše membrány |
| Odstoupení |
Typ a koncentrace odstoupenin, aditivum, pH, teplota, čas |
| Denaturace a refaldování |
Solubilizace proteinů inkluziních těles |
Koncentrace denaturantu (např. Urea, Guanidin HCl, silný iontový detergent), detergenty (např. Sódiová dodecylsulfonát, SDS), redukční agenty (např. Dithiothreitol, DTT), chelátory (Ethylenediaminetetraacetonová kyselina, EDTA), teplota, čas |
| Přechylování proteinů |
Metody přechylování (rozpění, dialýza nebo SEC přechylování), Koncentrace proteinů, Vzorky, pH, Teplota, Čas, Oxydanty a Redukční látky (např., glutation, GSH/Oxidovaný glutation, GSSH, DTT/GSSH, Cystein/Cystin), Malé molekulární aditivy (L-arginin, Urea, Guanidin/HCl, a Detergenty) |
| Zachycení, Meziproduktové čištění a Dohotování |
AC (Afinní chromatografie) |
Několik druhů chromatografického materiálu/sloupečku (např., AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), délka a průměr sloupku, složení vzorku, objem vstupní dávky, složení pohyblivé fáze (adsorpce a desorpce), pH, rychlost toku, podmínky vazby, mytí a eluce. |
| IEX (Anionová nebo Kationová exchaňovací chromatografie) |
| HIC (Hydrofobní interakční chromatografie) |
| Odsočování a/nebo velikostní exkluzní chromatografie (SEC) |
| RPC (Reverzní fazová chromatografie) |
| MMC, Míchací chromatografie |
Případová studie
PŘÍPAD 1
Jsme pověřeni vývojem a optimalizací procesu čištění na dolním proudu s cílem zvýšit čistotu bílkoviny z 85 % na 90 % přitom, že se sníží kroky chromatografie.
Yaohai vyvinul spolehlivý a škálovatelný proces čištění s třemi kroky chromatografie pro cílové bílkovinu, bakteriální alergén. A konečná čistota dosáhla 95 %.
PŘÍPAD 2
Yaohai byl jmenován naším klientem k optimalizaci procesu odstraňování endotoxinů z vakcíny podobné viru (VLP).
Náš tým provedl optimalizaci parametrů chromatografie a připravil látku léku s čistotou 98 % a zbytkovými endotoxiny 12,8EU/mg.
Naše zkušenosti
- Byli jsme zapojeni do vývoje a výroby různých velkých molekul, včetně rekombinantních subunitových vakcín, VLP, hormonů (insulin, GLP-1, hormon růstu), cytokinů (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), růstových faktorů (EGF, FGF, NGF), nanotěles/jednodoménových antitěl (sdAbs), enzymů atd.
Zařízení
Používáme průmyslově vedoucí systémy AKTA Pure, AKTA Avant a Preparative HPLC pro provádění různých chromatografických metod včetně afinity, iontového výměnu, hydrofobní interakce, reverzní fáze a chromatografie podle velikosti.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
