Rekombinantní proteiny často procházejí oxidací expozovaných bočných řetězců aminokyselin, jako jsou tryptofan (Trp) a methionin (Met), což mění fyzikálně-chemické vlastnosti proteinů. Tyto změny mohou ovlivnit biologické funkce dotčených proteinů, jako je ztráta vazby, snížení enzymové aktivity, nebo neočekávaně rychlé vyčištění. Proteiny jsou důležitými cíli pro oxidační reakce, protože reagují rychle s oxidanty a jsou hojně přítomny v buňkách, extracelulárních tkáních a tělesných tekutinách.
Proto je sledování oxidace proteinů kritické pro úspěšný vývoj biopharmaceutik.
Yaohai Bio-Pharma nabízí službu analýzy oxidace aminokyselin, která umožňuje určit oxidaci aminokyselin pomocí kapalné chromatografie spojené s hmotnostní spektrometrií (LC-MS).
Účastnili jsme se strukturní charakterizace bílkovin různých velkých molekul, včetně rekombinantních subunitních vakcín, nanotěles / VHHs / jednodoménových antitěl (sdAbs), fragmentů antitěl, hormonů/peptidů, cytokinů, růstových faktorů (GF), enzymů, kolagenů atd.
Regulační požadavky pro oxidaci aminokyselin
Podle směrnice ICH Q6B mohou být oxidované formy detekovány a charakterizovány chromatografickými, elektroforetickými a/nebo jinými relevantními analytickými metodami (např. vysoko výkonná kapalinová chromatografie (HPLC), kapilární elektroforeze, hmotnostní spektrometrie, kruhová dichroismus).
Analytické metody
| Analýza |
Metody |
| Oxidace aminokyselin |
LC-MS, reverzní fázová vysoko výkonná kapalinová chromatografie (RP-HPLC) nebo hydrofobní interakční chromatografie vysoko výkonná kapalinová chromatografie (HIC-HPLC) a hmotnostní spektrometrie |
Analytické postupy
1. Příprava vzorku
2. LC-MS
3. Analýza dat
Residua tryptofanu (Trp) jsou zvláště náchylná k oxidaci kvůli vysoké reaktivitě aromatického indolu s reaktivními druhy kyslíku. Oxidace Trp vyžaduje částečné vystavení Trp residuí, která normálně jsou zakryta v trojrozměrné struktuře bílkoviny.
Avšak, když dochází k oxidaci Trp residuí, mohou se transformovat v různé produkty, které mají velmi odlišné vlastnosti od původního Trp. Nejběžnější cesta oxidace Trp zahrnuje tvorbu N-formylkinurinu (Rozdíl ve hmotnosti: +32).
Dalším často oxidovaným aminokyselinami je methionin. Sulfanylový atom v Met residui může přijmout buď jeden nebo dva atomy kyslíku, což vedou ke tvorbě sulfoxidu (Rozdíl ve hmotnosti: +16) nebo sulfonu (Rozdíl ve hmotnosti: +32), odpovídajícím způsobem. Tato modifikace je relativně běžná kvůli obvykle vysokému povrchovému vystavení Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
