Deamidace bočných řetězců glutaminu a asparaginu je běžná modifikace vzhledem k vlivu na vlastnosti proteinových bioléčiv. Deamidace může nastat i u reziduí glutaminu, ale obvykle s mnohem nižší frekvencí. Rychlosti deamidace jsou ovlivněny teplotou, pH, lokální strukturou proteiny a okolními aminokyselinami.
Yaohai BioPharma nabízí službu testování deamidace aminokyselin, která umožňuje detekci deamidace aminokyselin pomocí kapalné chromatografie - hmotnostní spektrometrie (LC-MS).
Zabýváme se charakterizací struktury bílkovin různých velkých molekul, včetně rekombinantních subunitových vakcín, nanotěles/VHHs/jednodoménových protilátek (sdAbs), fragmentů protilátek, hormonů/peptidů, cytokinů, růstových faktorů (CF), enzymů, kolagenů atd.
Regulační požadavky pro deamidaci aminokyselin
Podle směrnice ICH Q6B mohou být deamidované formy detekovány a charakterizovány chromatografickými, elektroforetickými a/nebo jinými relevantními analytickými metodami.
Analytické metody
| Analýza |
Metody |
| Deamidace |
Vysokoefektivní kapalná chromatografie - hmotnostní spektrometrie (LC-MS) |
procedury
např., deamidace kyseliny asparagové
1. Enzymatická digestace
2. LC-MS za podmínek vysokoefektivní kapalné chromatografie (HPLC)
3. Analýza dat
Deamidace asparaginu probíhá prostřednictvím succinimidového mezistadia (Suc), které je citlivé na racemizaci a hydrolyzu, což dává čtyři izomery Asp, včetně L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp a D-IsoAsp.
Teoreticky by při deamidaci glutaminu mohlo vzniknout čtyři odpovídající izomery glutamové kyseliny prostřednictvím procesu podobného deamidaci asparaginu.
Vysokoryzešní massové spektrometrie snadno identifikuje rozdíl v hmotnosti 1 Da mezi peptidy obsahujícími Asn/Gln a jejich odpovídajícími deaminovanými protějšky Asp/Glu.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
