Besetting van N-glikosileringsplek is 'n fisiologiese kenmerk van glikoproteïene en produseer hoofsaaklik N-glikaan. Yaohai Bio-Pharma se N-glikosilasie-terreinbesettingsanalise-diens word uitgevoer deur vertering, vrystelling, verryking en analise deur gebruik te maak van vloeistofchromatografie-elektrossproei-ionisasie-massaspektrometrie-massaspektrometrie (LC-ESI-MS/MS).
Ons was betrokke by die proteïenstrukturele karakterisering van verskeie groot molekules, insluitend rekombinante subeenheid-entstowwe, nanoliggame/VHHs/ enkeldomein-teenliggaampies (sdAbs), teenliggaamfragmente, hormone/peptiede, sitokiene, groeifaktore (GF), ensieme, kollagene, ens.
Regulatoriese vereistes vir N-glikosilering Terreinbesetting
Volgens ICH Q6B-riglyn, "vir glikoproteïene word die koolhidraatinhoud (neutrale suikers, aminosuikers en siaalsure) bepaal. Verder word die struktuur van die koolhidraatkettings, die oligosakkariedpatroon (antennêre profiel) en die glikosileringsplek(ke) van die polipeptiedketting in die beste mate moontlik ontleed.”
Analitiese metode
| Analise |
Metodes |
| Besetting van N-glikosileringsplek |
LC-MS na deglikosilase en protease vertering |
Prosedures
1. Proteïenvertering van proteïene om klein peptiedfragmente te genereer.
2. N-glikaan vrystelling deur gebruik te maak van endoglikosidase H of PNGase F. Endoglikosidase H klief die binding tussen die twee GlcNAc-reste in die kern van N-gekoppelde glikane, terwyl PNGase F 'n glikoamidase is wat die binding tussen GlcNAc en Asn verbreek, wat die hele suikerketting en omskep Asn in Asp met massatoename van 1-Da.
3. N-glikopeptiedverryking via HILIC (hidrofiele interaksie vloeistofchromatografie)
4. Analise van N-gekoppelde glikosileringsplekbesetting deur gebruik te maak van LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
GEEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
