Rekombinante proteïene sien dikwels die oksidasie van blootgestelde aminosuur-sykettings, soos triptofaan (Trp) en metionien (Met), wat die fisies-chemiese eienskappe van proteïene verander. Hierdie veranderinge kan op hul beurt bydra tot die verandering van die biologiese funksies van die geaffekteerde proteïene, soos verlies aan binding, vermindering van ensiematiese aktiwiteit, onverwags vinnige opruiming. Proteïene is belangrike teikens vir oksidatiewe reaksies omdat hulle vinnig met oksidante reageer en volop in selle, ekstrasellulêre weefsels en liggaamsvloeistowwe voorkom.
Daarom is die monitering van proteïenoksidasie van kritieke belang vir suksesvolle biofarmaseutiese ontwikkeling.
Yaohai Bio-Pharma bied aminosuur-oksidasie-analise diens, wat jou toelaat om die aminosuur oksidasie te bepaal deur vloeistofchromatografie-massaspektrometrie (LC-MS).
Ons was betrokke by die proteïenstrukturele karakterisering van verskeie groot molekules, insluitend rekombinante subeenheid-entstowwe, nanoliggame/VHHs/enkeldomein-teenliggaampies (sdAbs), teenliggaamfragmente, hormone/peptiede, sitokiene, groeifaktore (GF), ensieme, kollagene, ens.
Regulatoriese vereistes vir aminosuuroksidasie
Volgens die ICH Q6B-riglyne kan geoksideerde vorms opgespoor en gekenmerk word deur chromatografiese, elektroforetiese en/of ander relevante analitiese metodes (bv. High Performance Liquid Chromatography (HPLC), kapillêre elektroforese, massaspektroskopie, sirkulêre dichroïsme).
Analitiese metodes
| Analise |
Metodes |
| Aminosuur oksidasie |
LC-MS, Omgekeerde Fase Hoëprestasie vloeistofchromatografie (RP-HPLC) of hidrofobiese interaksiechromatografie hoëprestasie vloeistofchromatografie (HIC-HPLC) en massaspektrometrie |
Analitiese prosedures
1. Monstervoorbereiding
2. LC-MS
3. Data-analise
Triptofaan (Trp)-reste is veral geneig tot oksidasie as gevolg van die hoë reaktiwiteit van die aromatiese indool met reaktiewe suurstofspesies. Trp-oksidasie vereis 'n mate van blootstelling van Trp-reste wat normaalweg in die driedimensionele struktuur van die proteïen begrawe is.
Wanneer Trp-reste egter geoksideer word, kan dit omskep in 'n verskeidenheid produkte met baie verskillende eienskappe as die oorspronklike Trp. Die mees algemene pad vir Trp-oksidasie sluit die vorming van N-formielkinurenien in (massaverskil: +32).
Nog 'n algemeen geoksideerde aminosuur is metionien. Die swaelatoom in die Met-residu kan óf een óf twee suurstofatome aanvaar wat lei tot die vorming van sulfoksied (massaverskil: +16) of sulfon (massaverskil: +32), dienooreenkomstig. Hierdie wysiging is relatief algemeen as gevolg van die tipies hoë oppervlakblootstelling van Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
GEEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
