Sự chiếm chỗ của N-glycosyl hóa là một đặc điểm sinh lý của glycoprotein và chủ yếu tạo ra N-glycan. Dịch vụ phân tích chiếm chỗ vị trí N-glycosyl hóa của Yaohai Bio-Pharma được thực hiện thông qua quá trình tiêu hóa, giải phóng, làm giàu và phân tích bằng phương pháp sắc ký lỏng-Phương pháp quang phổ khối ion hóa điện hóa-Khối phổ (LC-ESI-MS/MS).
Chúng tôi đã tham gia vào Nghiên cứu đặc tính cấu trúc protein của nhiều phân tử lớn khác nhau, bao gồm Vắc xin tiểu đơn vị tái tổ hợp, Nanobody/VHH/Kháng thể miền đơn (sdAbs), Mảnh kháng thể, Hormon/Peptit, Cytokine, Yếu tố tăng trưởng (GF), Enzyme, Collagen, vân vân.
Yêu cầu quy định đối với việc sử dụng địa điểm N-glycosyl hóa
Theo hướng dẫn của ICH Q6B, “đối với glycoprotein, hàm lượng carbohydrate (đường trung tính, đường amin và axit sialic) được xác định. Hơn nữa, cấu trúc của chuỗi carbohydrate, kiểu oligosacarit (cấu trúc anten) và (các) vị trí glycosyl hóa của chuỗi polypeptide được phân tích ở mức độ tốt nhất có thể.”
Phương pháp phân tích
| nghiên cứu |
Phương pháp |
| Chiếm vị trí N-glycosyl hóa |
LC-MS sau khi tiêu hóa deglycosylase và protease |
Thủ tục
1. Quá trình tiêu hóa protein của protein để tạo ra các đoạn peptide nhỏ.
2. Giải phóng N-glycan bằng cách sử dụng endoglycosidase H hoặc PNGase F. Endoglycosidase H cắt đứt liên kết giữa hai gốc GlcNAc trong lõi của glycans liên kết với N, trong khi PNGase F là một glycoamidase cắt đứt liên kết giữa GlcNAc và Asn, giải phóng toàn bộ chuỗi đường và chuyển Asn thành Asp với khối lượng tăng dần 1-Da.
3. Làm giàu N-glycopeptide thông qua HILIC (Sắc ký lỏng tương tác ưa nước)
4. Phân tích khả năng chiếm chỗ của quá trình glycosyl hóa liên kết N bằng LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
KHÔNG
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
