Protein tái tổ hợp thường xảy ra quá trình oxy hóa các chuỗi bên axit amin tiếp xúc, chẳng hạn như tryptophan (Trp) và methionine (Met), làm thay đổi tính chất hóa lý của protein. Những thay đổi này có thể góp phần làm thay đổi chức năng sinh học của các protein bị ảnh hưởng, chẳng hạn như mất liên kết, giảm hoạt động của enzyme, đào thải nhanh chóng một cách bất ngờ. Protein là mục tiêu quan trọng cho các phản ứng oxy hóa vì chúng phản ứng nhanh với các chất oxy hóa và có nhiều trong tế bào, mô ngoại bào và dịch cơ thể.
Do đó, việc theo dõi quá trình oxy hóa protein là rất quan trọng để phát triển dược phẩm sinh học thành công.
Yaohai Bio-Pharma cung cấp dịch vụ phân tích quá trình oxy hóa axit amin, cho phép bạn xác định quá trình oxy hóa axit amin bằng phương pháp sắc ký lỏng-khối phổ (LC-MS).
Chúng tôi đã tham gia vào Nghiên cứu đặc tính cấu trúc protein của nhiều phân tử lớn khác nhau, bao gồm Vắc xin tiểu đơn vị tái tổ hợp, Nanobody/VHH/Kháng thể miền đơn (sdAbs), Mảnh kháng thể, Hormon/Peptide, Cytokine, Yếu tố tăng trưởng (GF), Enzyme, Collagen, vân vân.
Yêu cầu pháp lý đối với quá trình oxy hóa axit amin
Theo hướng dẫn của ICH Q6B, các dạng oxy hóa có thể được phát hiện và đặc trưng bằng phương pháp sắc ký, điện di và/hoặc các phương pháp phân tích liên quan khác (ví dụ, Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC), điện di mao quản, quang phổ khối, lưỡng sắc tròn).
Phương pháp phân tích
| nghiên cứu |
Phương pháp |
| Quá trình oxy hóa axit amin |
LC-MS, Sắc ký lỏng hiệu năng cao pha đảo (RP-HPLC) hoặc Sắc ký tương tác kỵ nước Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HIC-HPLC) và phép đo phổ khối |
Thủ tục phân tích
1. Chuẩn bị mẫu
2. LC-MS
KHAI THÁC. Phân tích dữ liệu
Dư lượng tryptophan (Trp) đặc biệt dễ bị oxy hóa do khả năng phản ứng cao của indole thơm với các loại oxy phản ứng. Quá trình oxy hóa Trp đòi hỏi phải tiếp xúc một số gốc Trp thường được chôn trong cấu trúc ba chiều của protein.
Tuy nhiên, khi dư lượng Trp bị oxy hóa, chúng có thể chuyển hóa thành nhiều loại sản phẩm có tính chất rất khác so với Trp ban đầu. Con đường phổ biến nhất cho quá trình oxy hóa Trp bao gồm sự hình thành N-formylkinurenine (Chênh lệch khối lượng: +32).
Một axit amin thường bị oxy hóa khác là methionine. Nguyên tử lưu huỳnh trong cặn Met có thể tiếp nhận một hoặc hai nguyên tử oxy dẫn đến hình thành sulfoxide (Chênh lệch khối lượng: +16) hoặc sulfone (Chênh lệch khối lượng: +32), tương ứng. Sự sửa đổi này tương đối phổ biến do sự tiếp xúc bề mặt thường cao của Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
KHÔNG
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
