Phát triển quy trình hạ nguồn

CDMO vi sinh vật

Tầm quan trọng của việc phát triển quy trình hạ nguồn (DSP)

Toàn bộ môi trường lên men chứa protein mục tiêu hoặc plasmid, cũng như các tạp chất liên quan đến sản phẩm và quy trình, ví dụ: chất kết tụ, chất nền tế bào vi sinh vật, Protein tế bào chủ (HCP), DNA tế bào chủ (HCD), nội độc tố và kháng sinh.

Do đó, điều quan trọng là phải thiết kế một quy trình tinh chế, DSP hiệu quả, để loại bỏ một số tạp chất nhất định và tạo ra dược chất có chất lượng cao và có độ tinh khiết cao. Ngoài ra, việc tối ưu hóa quy trình tinh chế có thể giúp tăng khả năng thu hồi sản phẩm, giảm chi phí và cải thiện khả năng mở rộng và khả năng tái sản xuất của quy trình.

Từ khóa: phát triển quy trình, tối ưu hóa và xác nhận, quy trình tinh chế, sắc ký, loại bỏ tạp chất, loại bỏ HCP, loại bỏ HCD, loại bỏ nội độc tố, biến tính và tinh chế protein, lắp ráp VLP, liên hợp

Ứng dụng: Công nghiệp dược phẩm sinh học, y học cho người, thú y, vắc xin, sinh học phân tử lớn tái tổ hợp, sinh học tái tổ hợp, thuốc thử sinh học

Giải pháp DSP của Yaohai Bio-Pharma

Chúng tôi có nhiều kinh nghiệm trong việc phân lập các protein mục tiêu hoặc plasmid khỏi các ma trận phức tạp bằng cách phát triển và tối ưu hóa quy trình tinh chế tiếp theo. Có nhiều loại hoạt động đơn vị khác nhau phù hợp cho việc tinh chế sinh học, bao gồm ly tâm, lọc, đồng nhất hóa, ly giải kiềm, siêu lọc, kết tủa, biến tính và tinh chế protein, sắc ký, v.v.

Các dịch vụ phát triển thanh lọc hiện có của chúng tôi bao gồm:

Phát triển toàn bộ quá trình tinh chế từ thu thập tế bào hoặc chất nổi trên bề mặt đến thành phần hoạt chất cuối cùng.
Tối ưu hóa quy trình tinh chế dựa trên các tạp chất liên quan đến sản phẩm và quy trình để tăng chất lượng và độ an toàn của sản phẩm, ví dụ: HCP, HCD, nội độc tố.
Xác định và tối ưu hóa các thông số chính trong một hoặc một số hoạt động của đơn vị, bao gồm ly giải tế bào, lọc dòng tiếp tuyến, sàng lọc nhựa, sắc ký, biến tính protein và tinh chế, v.v.
Tối ưu hóa quy trình về chất lượng, năng suất, khả năng thu hồi, chi phí và khả năng mở rộng.
Xác nhận quá trình thanh lọc xuôi dòng.
Đánh giá phạm vi tham số dựa trên rủi ro và Thiết kế thử nghiệm (DoE) trong mô hình hóa quy trình.

Chi tiết dịch vụ

Nền tảng tinh chế protein hoặc plasmid được tiêu chuẩn hóa dựa trên nhiều bước tinh chế thô và ít hơn 4 bước sắc ký, bao gồm thu giữ, tinh chế trung gian và đánh bóng.

Chi tiết dịch vụ	Hoạt động đơn vị	Thông số
Thanh lọc thô	Ly tâm	Tốc độ quay, thời gian
	Đồng nhất áp suất cao	Tổng hàm lượng chất rắn, áp suất, chu kỳ
	Ly giải kiềm liên tục	Tỷ lệ tế bào được huyền phù lại so với dung dịch ly giải, thời gian ly giải
	Lọc dòng tiếp tuyến	Vật liệu màng và kích thước lỗ chân lông, Áp suất màng cấp liệu (TMP), Tỷ lệ thể tích lọc trên diện tích màng
	sự kết tủa	Loại kết tủa và nồng độ, chất phụ gia, pH, nhiệt độ, thời gian
Biến tính và tinh chế	Hòa tan protein cơ thể	Nồng độ biến tính (ví dụ: Urê, Guanidine HCl, Chất tẩy rửa ion mạnh), Chất tẩy rửa (ví dụ: Natri dodecyl sunfat, SDS), Chất khử (ví dụ: Dithiothreitol, DTT), Chất tạo phức (axit Ethylenediaminetetraacetic, EDTA), Nhiệt độ, Thời gian
Biến tính và tinh chế	Tinh chế protein	Phương pháp cuộn lại (pha loãng, lọc máu hoặc tinh chế SEC), Nồng độ protein, Chất đệm, pH, Nhiệt độ, Thời gian, Chất oxy hóa và Chất khử (ví dụ: Glutathione, GSH/glutathione bị oxy hóa, GSSH, DTT/GSSH, Cysteine/Cystine), Phụ gia phân tử nhỏ (L-arginine, Urê, Guanidine/HCl và Chất tẩy rửa)
Thu giữ, làm sạch trung gian và đánh bóng	AC (Sắc ký ái lực)	Một số loại nhựa/cột sắc ký (ví dụ: AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), Chiều dài và đường kính cột, Thành phần đệm, Thể tích tiêm, Thành phần pha động (Hấp phụ và giải hấp), pH, Tốc độ dòng chảy, Liên kết, Điều kiện rửa và rửa giải.
	IEX (Sắc ký trao đổi anion hoặc cation)
	HIC (Sắc ký tương tác kỵ nước)
	Sắc ký khử muối và/hoặc sắc ký loại trừ kích thước (SEC)
	RPC (Sắc ký pha đảo)
	MMC, Sắc ký chế độ hỗn hợp

nghiên cứu trường hợp

Trường hợp 1

Chúng tôi được giao nhiệm vụ phát triển và tối ưu hóa quy trình tinh chế tiếp theo để tăng độ tinh khiết của protein từ 85% lên 90% đồng thời giảm các bước sắc ký.

Yaohai đã cung cấp một quy trình tinh chế mạnh mẽ và có thể mở rộng với 3 bước sắc ký cho protein mục tiêu, một loại vi khuẩn gây dị ứng. Và độ tinh khiết cuối cùng đạt 95%.

Trường hợp 2

Yaohai được khách hàng của chúng tôi chỉ định để tối ưu hóa quy trình loại bỏ nội độc tố của vắc xin hạt giống vi rút (VLP).

Nhóm chúng tôi đã thực hiện tối ưu hóa các thông số sắc ký và điều chế được dược chất có độ tinh khiết 98% và dư lượng nội độc tố là 12.8EU/mg.

Kinh nghiệm của chúng tôi

Chúng tôi đã tham gia vào việc phát triển và sản xuất nhiều phân tử lớn khác nhau, bao gồm vắc xin tiểu đơn vị tái tổ hợp, VLP, hormone (insulin, GLP-1, hormone tăng trưởng), cytokine (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21 ), các yếu tố tăng trưởng (EGF, FGF, NGF), nanobody/kháng thể miền đơn (sdAbs), enzyme, v.v.

Equipment

Chúng tôi sử dụng các hệ thống AKTA Pure, AKTA Avant và Preparative HPLC hàng đầu trong ngành để thực hiện các phương pháp sắc ký khác nhau bao gồm ái lực, trao đổi ion, tương tác kỵ nước, pha đảo và sắc ký loại trừ kích thước.

Tất cả danh mục

Phát triển quy trình hạ nguồn

CDMO vi sinh vật

Nghiên cứu & Khám phá

Kỹ thuật căng thẳng

Sàng lọc chủng

Ngân hàng tế bào vi khuẩn

Chuẩn bị protein không có thẻ

Chuẩn bị Plasmid tùy chỉnh

Phát triển

Ngân hàng tế bào vi khuẩn

Phát triển quy trình ngược dòng

Phát triển quy trình hạ nguồn

Phát triển công thức

Tăng quy mô thí điểm

Sản xuất Chế tạo

Sản xuất GMP để cung cấp lâm sàng

Sản xuất GMP để cung cấp thương mại

Phân tích và thử nghiệm

Đặc điểm ngân hàng tế bào vi khuẩn

Phát triển phương pháp phân tích

Quản lý chất lượng

Đặc điểm cấu trúc protein

Nghiên cứu độ ổn định

Các vấn đề pháp lý

Các vấn đề pháp lý

Tư vấn chiến lược điều tiết

Chuẩn bị CMC (CTD)

Ứng dụng IND hoặc BLA