Các protein tái tổ hợp thường gặp hiện tượng oxi hóa của các nhóm bên acid amin bị phơi bày, chẳng hạn như tryptophan (Trp) và methionine (Met), làm thay đổi đặc tính vật lý hóa học của protein. Những thay đổi này có thể dẫn đến việc thay đổi chức năng sinh học của các protein bị ảnh hưởng, chẳng hạn như mất khả năng gắn kết, giảm hoạt tính enzym, hoặc quá trình đào thải nhanh bất thường. Protein là mục tiêu quan trọng cho các phản ứng oxi hóa vì chúng phản ứng nhanh với chất oxi hóa và tồn tại nhiều trong tế bào, mô ngoài tế bào và dịch cơ thể.
Do đó, việc theo dõi sự oxi hóa protein là rất quan trọng đối với sự phát triển thành công của dược phẩm sinh học.
Yaohai Bio-Pharma cung cấp dịch vụ phân tích oxi hóa acid amin, giúp bạn xác định sự oxi hóa acid amin bằng phương pháp Cromatografi Lỏng-Kỹ thuật Phổ Khối (LC-MS).
Chúng tôi đã tham gia vào việc Đặc trưng Kết cấu Protein của các phân tử lớn khác nhau, bao gồm Vắc xin Tái tổ hợp, Nanobody/ VHHs/ Antibody đơn miền (sdAbs), Phân đoạn Antibody, Nội tiết tố/Peptide, Cytokine, Yếu tố Tăng trưởng (GF), Enzyme, Collagen, v.v.
Yêu cầu Quản lý về Oxidation Axit Amino
Theo hướng dẫn ICH Q6B, các dạng bị oxy hóa có thể được phát hiện và đặc trưng bằng các phương pháp sắc ký, điện di và/hoặc các phương pháp phân tích liên quan khác (ví dụ: Sắc ký Liquid High Performance (HPLC), điện di mao quản, phổ khối, nhịp độ vòng tròn).
Phương pháp phân tích
| Phân tích |
Phương pháp |
| Oxidation Axit Amino |
LC-MS, Sắc ký Liquid High Performance Pha Ngược (RP-HPLC) hoặc Sắc ký Tương tác Kỵ Nước High Performance Liquid Chromatography (HIC-HPLC) và phổ khối |
Quy trình Phân tích
1. Chuẩn Bị Mẫu
2. LC-MS
3. Phân tích Dữ liệu
Các gốc tryptophan (Trp) đặc biệt dễ bị oxy hóa do sự phản ứng cao của vòng thơm indole với các loài oxy phản ứng. Sự oxy hóa Trp yêu cầu một phần Trp phải được phơi bày, mặc dù thông thường chúng bị chôn vùi trong cấu trúc ba chiều của protein.
Tuy nhiên, khi các gốc Trp bị oxy hóa, chúng có thể biến đổi thành nhiều sản phẩm khác nhau có tính chất rất khác so với Trp ban đầu. Con đường oxy hóa Trp phổ biến nhất bao gồm việc hình thành N-formylkinurenine (Sự chênh lệch khối lượng: +32).
Một axit amin thường bị oxy hóa khác là methionine. Nguyên tử lưu huỳnh trong gốc Met có thể nhận một hoặc hai nguyên tử oxy dẫn đến việc hình thành sulfoxide (Sự chênh lệch khối lượng: +16) hoặc sulfone (Sự chênh lệch khối lượng: +32), tương ứng. Sự sửa đổi này khá phổ biến do mức độ phơi bày bề mặt cao điển hình của Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
