ไขความลับของการสกัดพลาสมิดคุณภาพสูง

การสกัดพลาสมิดมีความสำคัญสำหรับนักวิจัย พลาสมิดซึ่งเป็นเวกเตอร์ยีนนั้นมีบทบาทสำคัญในงานวิจัยวัคซีนและการบำบัดด้วยยีน โดยที่คุณภาพเป็นสิ่งที่สำคัญ ปัจจัยหลักของคุณภาพรวมถึงสัดส่วนของพลาสมิดแบบซูเปอร์คอยล์และปริมาณเอนโดท็อกซิน ข้อกำหนดต่างกันไป: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90% และมี DNA แบบเส้นตรง/วงกลมเปิดน้อยกว่า 5% ลูกค้ามักจะชอบพลาสมิดแบบซูเปอร์คอยล์ ≥95% ระดับเอนโดท็อกซินคือ: การวิจัย (>50 EU/µg), การ transfact (<50 EU/µg) และปราศจากเอนโดท็อกซิน (<0.1 EU/µg)

DNA พลาสมิดแบบซูเปอร์คอยล์

พลาสมิดจาก Escherichia coli ประกอบด้วย DNA แบบซูเปอร์คอยล์ (SC), วงกลมเปิด (OC) และเส้นตรง (L) สัดส่วน SC สูงช่วยเพิ่มประสิทธิภาพของการ transfact และการแสดงออก เช่น พลาสมิดที่มี SC 85.45% มีประสิทธิภาพ transfact สูงกว่า 2.5 เท่า และพลาสมิดที่มี SC 93.28% มีการแสดงออกของ HGF สูงกว่า 1.8 เท่า ซึ่งยืนยันความเหนือกว่าของ DNA แบบ SC

ดีเอ็นเอวงกลมเปิด: เมื่อเกิดการแตกหักของสายเดียวในดีเอ็นเอคู่ โครงสร้างซูเปอร์คอยล์จะคลายตัวลง กลายเป็นพลาสไมด์วงกลมเปิดที่มีปริมาตรใหญ่กว่าและเคลื่อนที่ช้าที่สุดในระหว่างการแยกด้วยไฟฟ้า และอยู่บนสุด

ดีเอ็นเอเส้นตรง: เมื่อเกิดการแตกหักของสายทั้งสองในดีเอ็นเอพลาสไมด์ จะก่อให้เกิดโครงสร้างเส้นตรงที่มีปริมาตรเล็กกว่า ทำให้เคลื่อนที่เร็วกว่าดีเอ็นเอวงกลมเปิด แต่ช้ากว่าดีเอ็นเอซูเปอร์คอยล์ และอยู่ลำดับที่สอง

ดีเอ็นเอซูเปอร์คอยล์: เฮลิกซ์สองเส้นพันกัน บิดเป็นโครงสร้างซูเปอร์คอยล์ตามรูปแบบของเฮลิกซ์ดีเอ็นเอ มีปริมาตรเล็กที่สุดและเคลื่อนที่เร็วที่สุดในระหว่างการแยกด้วยไฟฟ้า และอยู่ล่างสุด

การวิเคราะห์เชิงปริมาณของสัดส่วนดีเอ็นเอซูเปอร์คอยล์

ห้องปฏิบัติการใช้การแยกด้วยไฟฟ้าเจลอะแกโรส (AGE) และ Gel-Pro Analyzer เพื่อประเมินสัดส่วนของดีเอ็นเอซูเปอร์คอยล์ผ่านภาพจากการแยกด้วยไฟฟ้า ภาพหนึ่งแสดงสัดส่วนดีเอ็นเอ SC 97.539% ในขณะที่อีกภาพหนึ่งแสดงดีเอ็นเอ SC 63.833% และ OC 36.167% (ดีเอ็นเอเส้นตรงมองไม่เห็น)

ความลับของเอนโดทอกซินในพลาสไมด์

เอนโดท็อกซินเป็นองค์ประกอบของชั้นนอกของผนังเซลล์ของแบคทีเรียแกรมลบ ปล่อยออกมาหลังจากการตายหรือการแตกตัวของแบคทีเรีย มีสารลิโพโพลีแซคคาไรด์ A ซึ่งเป็นสารพิษ ในระหว่างการสกัดพลาสมิด เอนโดท็อกซินจะเข้าไปในสารละลายการแตกตัว ส่งผลต่อประสิทธิภาพของการ transfected และกระตุ้นการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันที่ไม่จำเพาะ นำไปสู่ผลบวกเท็จในงานทดลอง

การวิเคราะห์เชิงปริมาณและคุณภาพของเอนโดท็อกซิน

การทดสอบ Limulus amebocyte lysate (LAL) ตรวจพบเอนโดท็อกซินผ่านกระบวนการรวมตัวกับกรด 2-keto-3-deoxyoctonic acid (KDO) ในลิโพโพลีแซคคาไรด์ (LPS) เป็นการวิเคราะห์เชิงคุณภาพและกึ่งเชิงปริมาณ โดยแสดงถึงการมีอยู่ของเอนโดท็อกซินผ่านการแข็งตัวหรือการเปลี่ยนสีเมื่อผสมกับตัวอย่าง

Yaohai Bio-Pharma ให้บริการพลาสมิดซูเปอร์คอยล์ที่ปราศจากเอนโดท็อกซิน การเอาท์ซอร์สกับ Yaohai จะช่วยเพิ่มประสิทธิภาพของการ transfected และการแสดงออก พลาสมิดที่ส่งมอบจะมีสัดส่วน SC อย่างน้อย 95% (เฉลี่ย ±10%) และระดับเอนโดท็อกซิน ≤0.1, ≤0.01 หรือ ≤0.005 EU/μg

เราได้ดำเนินการค้นหาพันธมิตรระดับโลกทั้งหน่วยงานหรือบุคคลทั่วไปอย่างแข็งขัน เราเสนอค่าตอบแทนที่แข่งขันได้มากที่สุดในอุตสาหกรรม หากคุณมีคำถามใด ๆ กรุณาติดต่อเราได้โดยตรง: [email protected]