ไขความลับของการสกัดพลาสมิดคุณภาพสูง

การสกัดพลาสมิดมีความสำคัญอย่างยิ่งสำหรับนักวิจัย เนื่องจากพลาสมิดเป็นพาหะของยีน จึงมีความสำคัญอย่างยิ่งในการวิจัยวัคซีนและยีนบำบัด ซึ่งคุณภาพเป็นสิ่งสำคัญ ปัจจัยด้านคุณภาพที่สำคัญ ได้แก่ สัดส่วนของซุปเปอร์คอยล์และปริมาณเอนโดทอกซิน กฎระเบียบต่างๆ แตกต่างกันไป: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90% โดยมีดีเอ็นเอเชิงเส้น/เปิดวงกลมน้อยกว่า 5% ลูกค้ามักชอบซุปเปอร์คอยล์มากกว่า ≥95% ระดับเอนโดทอกซินมีดังนี้: การวิจัย (>50 EU/µg), การถ่ายโอนยีน (<50 EU/µg) และปราศจากเอนโดทอกซิน (<0.1 EU/µg)

ดีเอ็นเอพลาสมิดซุปเปอร์คอยล์

พลาสมิดจาก Escherichia coli ได้แก่ DNA แบบซุปเปอร์คอยล์ (SC) แบบโอเพนเซอร์คิวลาร์ (OC) และแบบเส้นตรง (L) สัดส่วนของ SC ที่สูงช่วยเพิ่มประสิทธิภาพการถ่ายโอนยีนและการแสดงออก ตัวอย่างเช่น การถ่ายโอนยีนของพลาสมิด SC 85.45% จะสูงกว่า 2.5 เท่า และการแสดงออกของ HGF ของพลาสมิด SC 93.28% จะสูงกว่า 1.8 เท่า ซึ่งยืนยันถึงความเหนือกว่าของ DNA แบบ SC

DNA แบบวงกลมเปิด: เมื่อสาย DNA แบบสองสายหนึ่งสายขาด โครงสร้างแบบซุปเปอร์คอยล์จะหลวมขึ้น ทำให้เกิดพลาสมิดแบบวงกลมเปิดที่มีปริมาตรมากขึ้น ซึ่งเคลื่อนที่ช้าที่สุดในระหว่างการอิเล็กโทรโฟเรซิส และอยู่ในตำแหน่งที่ด้านบนสุด

DNA เชิงเส้น: เมื่อสาย DNA พลาสมิดทั้งสองสายแตกหัก โครงสร้างเชิงเส้นจะเกิดขึ้น โดยมีปริมาตรที่ค่อนข้างเล็กกว่า ซึ่งจะเคลื่อนที่เร็วกว่า DNA แบบวงกลมเปิดแต่ช้ากว่า DNA แบบขดซุปเปอร์คอยล์ ซึ่งอยู่ในตำแหน่งที่สอง

DNA แบบขดซุปเปอร์คอยล์: เกลียวดีเอ็นเอ 2 เส้นพันกันจนเกิดเป็นโครงสร้างแบบขดซุปเปอร์คอยล์ตามเกลียวดีเอ็นเอ มีปริมาตรน้อยที่สุดและเคลื่อนที่เร็วที่สุดในระหว่างการทำอิเล็กโทรโฟเรซิส โดยอยู่ด้านล่าง

การวิเคราะห์เชิงปริมาณของสัดส่วนซุปเปอร์คอยล์

ห้องปฏิบัติการใช้การวิเคราะห์ด้วยเจลอิเล็กโทรโฟรีซิสแบบอะกาโรส (AGE) และเครื่องวิเคราะห์ Gel-Pro เพื่อประเมินสัดส่วนของซุปเปอร์คอยล์ผ่านภาพอิเล็กโทรโฟรีซิส ภาพหนึ่งแสดงดีเอ็นเอแบบ SC 97.539% ในขณะที่อีกภาพแสดงดีเอ็นเอแบบ SC 63.833% และดีเอ็นเอแบบ OC 36.167% (ดีเอ็นเอแบบเส้นตรงไม่ปรากฏให้เห็น)

ความลับของเอนโดทอกซินในพลาสมิด

เอนโดทอกซินเป็นส่วนประกอบของผนังเซลล์ชั้นนอกของแบคทีเรียแกรมลบ ซึ่งปล่อยออกมาหลังจากแบคทีเรียตายหรือแตกสลาย ซึ่งประกอบด้วยไลโปโพลีแซ็กคาไรด์ A ซึ่งเป็นพิษ ในระหว่างการสกัดพลาสมิด เอนโดทอกซินจะเข้าสู่สารละลายแตกสลาย ทำให้ประสิทธิภาพการถ่ายโอนยีนลดลง และกระตุ้นการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันแบบไม่จำเพาะ ส่งผลให้เกิดผลบวกปลอมในการทดลอง

การวิเคราะห์เชิงปริมาณและเชิงคุณภาพของเอนโดทอกซิน

การทดสอบไลเสทอะมีโบไซต์ลิมูลัส (LAL) ตรวจหาเอนโดทอกซินผ่านการเกาะกลุ่มกับกรด 2-คีโต-3-ดีออกซีออกโทนิก (KDO) ในไลโปโพลีแซ็กคาไรด์ (LPS) ซึ่งเป็นการทดสอบเชิงคุณภาพและกึ่งเชิงปริมาณ โดยบ่งชี้การมีอยู่ของเอนโดทอกซินผ่านการแข็งตัวหรือการเปลี่ยนสีเมื่อผสมกับตัวอย่าง

Yaohai Bio-Pharma นำเสนอพลาสมิดแบบซุปเปอร์คอยล์ที่ปราศจากเอนโดทอกซิน การเอาท์ซอร์สไปยัง Yaohai ช่วยเพิ่มประสิทธิภาพการถ่ายโอนยีนและการแสดงออก พลาสมิดที่ส่งมอบมีสัดส่วน SC ≥95% (ค่าเฉลี่ย 85%±10%) และระดับเอนโดทอกซิน ≤0.1, ≤0.01 หรือ ≤0.005 EU/μg

นอกจากนี้เรายังกระตือรือร้นในการแสวงหาพันธมิตรระดับสถาบันหรือรายบุคคลทั่วโลก เราเสนอค่าตอบแทนที่แข่งขันได้มากที่สุดในอุตสาหกรรม หากคุณมีคำถามใด ๆ โปรดติดต่อเรา: [email protected]