การปรับปรุงความสมบูรณ์ของเซลล์ E. coli สำหรับการผลิตไบโอฟาร์มา

ในสาขาของชีวเภสัชภัณฑ์ Escherichia coli (E. coli) มีบทบาทสำคัญในฐานะโฮสต์สำหรับการแสดงออกของโปรตีนรีคอมบิแนนต์ การคงอยู่ของเซลล์ E. coli เป็นสิ่งสำคัญสำหรับปริมาณ คุณภาพ และต้นทุนการผลิต ความสมบูรณ์นี้เกี่ยวข้องกับโครงสร้างและการทำงานของเยื่อหุ้มภายใน (IM) และเยื่อหุ้มภายนอก (OM) โดยตรง

Yaohai Bio-Pharma มีประสบการณ์ 15 ปีในด้านการหมัก E. coli และการแสดงออกของโปรตีนรีคอมบิแนนต์ เราใช้กลยุทธ์ต่าง ๆ เพื่อรักษาความสมบูรณ์ของเซลล์ E. coli ในระดับสูง ปริมาณพลาสมิดเกินกว่า 1 กรัม/ลิตรภายในรอบการเพาะเลี้ยง 30 ชั่วโมง โดยอาศัยประสบการณ์ที่กว้างขวางในการแสดงออกของจุลชีพ Yaohai Bio-Pharma ได้สรุปกลยุทธ์ที่มีประสิทธิภาพหลายประการเพื่อตรวจสอบและปรับปรุงความสมบูรณ์ของเซลล์ E. coli ระหว่างการผลิตชีวเภสัชภัณฑ์

เทคนิคในการตรวจสอบความสมบูรณ์ของเซลล์ E. coli

ไซโตเมตรีแบบไหล: ใช้สีย้อมเรืองแสงเพื่อแยกสถานะของเซลล์ เช่น propidium iodide สำหรับการตรวจวัดความเป็นอยู่ของเซลล์ และ SYTO9 สำหรับประเมินความพรุนของเยื่อหุ้มเซลล์ (OM) อย่างไรก็ตาม มันต้องการค่าใช้จ่ายสูงสำหรับสารย้อมและกระบวนการที่ซับซ้อน

วิธีการแบบโครมาโทเมตรี: สะท้อนถึงการทำลายเซลล์โดยการตรวจวัดปริมาณ DNA กิจกรรมของเอนไซม์ ฯลฯ ในสารละลายเหนือ เช่น การใช้ชุดสาร PicoGreen และการตรวจวัดกิจกรรมของฟอสฟาเตสในด่าง วิธีเหล่านี้อย่างไรก็ตาม มีขั้นตอนที่ยุ่งยากและต้องใช้สารเคมีที่มีราคาแพง

โครมาโทกราฟีของเหลวความเร็วสูง: ใช้สำหรับการตรวจวัดแบบไม่ออนไลน์ของความเข้มข้นของผลิตภัณฑ์นอกเซลล์เพื่อประเมินการรั่วไหลของเยื่อหุ้มเซลล์ (OM) อย่างไรก็ตาม การอัตโนมัติของมันซับซ้อนและเวลาในการวิเคราะห์นาน

เทคนิคสเปกโตรโฟโตเมตรีแบบสั่น: เช่น สเปกโตรโฟโตเมตรีอินฟราเรดใกล้และอินฟราเรดกลาง ซึ่งมีศักยภาพในการประยุกต์ใช้งานแต่จำเป็นต้องเอาชนะปัญหาการแทรกแซงของสเปกตรัมและการวิเคราะห์ข้อมูล

สเปกโตรสโคปีดายไฟฟ้า: ประเมินความสมบูรณ์ของเยื่อหุ้มเซลล์โดยการวัดแรงต้านทานของสารแขวนเซลล์ ซึ่งช่วยให้สามารถตรวจสอบแบบเรียลไทม์ออนไลน์ได้ อย่างไรก็ตาม มันอาจถูกแทรกแซงและยากต่อการสอบเทียบ

ไบโอเซนเซอร์: สามารถตรวจจับสารที่รั่วไหลออกมาจากภายในเซลล์หรือเพอริพลาสซึม แต่มีปัญหา เช่น การฟื้นฟูเซนเซอร์ที่ยาก

การวัดความหนืดและความหนาแน่น: มีต้นทุนต่ำและวิเคราะห์ได้รวดเร็ว แต่ขาดความจำเพาะ และจำเป็นต้องพิจารณาระเบียบข้อมูลหลายชุดสำหรับการตัดสินใจ

ปัจจัยที่ส่งผลต่อความสมบูรณ์ของเซลล์

วิศวกรรมเชื้อพันธุ์: เปลี่ยนความสมบูรณ์ของเยื่อหุ้มนอกผ่านการวิศวกรรมพันธุกรรม เช่น การกลายพันธุ์ของยีนโปรตีนไขมัน แต่อาจส่งผลกระทบต่อการเจริญเติบโตของเชื้อพันธุ์

ความเครียดที่เกิดจากการกระตุ้น: การแสดงออกของโปรตีน рекомไบแนทในปริมาณมากทำให้เกิดภาระเมตาบอลิก ส่งผลต่อสรีรวิทยาของเซลล์ ดังนั้นการควบคุมระดับการแสดงออกอย่างเหมาะสมจึงจำเป็น

อัตราการให้สารอาหาร: อัตราการให้ที่สูงหรือต่ำเกินไปส่งผลต่อการทำลายเซลล์และความสมบูรณ์ของเยื่อหุ้มนอก

อุณหภูมิและออกซิเจน: อุณหภูมิสูงและความพร้อมของออกซิเจนต่ำจะเพิ่มความเครียดในการแสดงออกและการรั่วไหลของ OM ตามลำดับ แต่ผลกระทบเฉพาะอาจแตกต่างกันไป

ออสโมติกส์: ใช้เพื่อปล่อยโปรตีนในเปอริพลาสม แต่ทำให้เซลล์เสียหายและลดความสามารถในการอยู่รอดของเซลล์ ส่งผลให้การนำไปใช้มีข้อจำกัด

สรุป การวิจัยในอนาคตจำเป็นต้องศึกษารายละเอียดเกี่ยวกับกลไกและการควบคุมสภาพแวดล้อมของการซ่อมแซมเยื่อหุ้มเซลล์ เพื่อควบคุมความสมบูรณ์ของเยื่อหุ้มเซลล์ได้อย่างแม่นยำ การปรับปรุงวิธีการตรวจสอบและการวิเคราะห์ปัจจัยที่มีผลต่อกระบวนการ จะช่วยเพิ่มคุณภาพของผลิตภัณฑ์ และผลักดันการพัฒนาอุตสาหกรรมเภสัชภัณฑ์ชีวภาพ

เราได้ดำเนินการค้นหาพันธมิตรระดับโลกทั้งสถาบันและบุคคลอย่างต่อเนื่อง เราเสนอค่าตอบแทนที่แข่งขันได้มากที่สุดในอุตสาหกรรม หากท่านมีคำถามใด ๆ กรุณาติดต่อเราได้ที่ [email protected]