เทคนิคการประกอบนวัตกรรมสำหรับการสังเคราะห์ยีนขนาดใหญ่

เทคโนโลยีการประกอบสำหรับการสังเคราะห์ชิ้นส่วน DNA ขนาดใหญ่ตั้งแต่ต้นเป็นรากฐานของการสังเคราะห์ยีน ซึ่งรวมถึงวิธีการต่างๆ เช่น BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, การประกอบ Gibson, CPEC และ Overlap PCR เนื่องจากข้อจำกัดของเทคโนโลยีปัจจุบันในการสังเคราะห์ DNA ที่มีความยาวยีนอย่างแม่นยำในขั้นตอนเดียว จึงจำเป็นต้องผสมผสานเทคนิคการประกอบในหลอดทดลองและในร่างกายเพื่อประกอบชิ้นส่วนโอลิโกนิวคลีโอไทด์ที่สังเคราะห์เป็นส่วนๆ ให้เป็นชิ้นส่วน DNA ยาวๆ

เทคนิคการประกอบในหลอดทดลอง

การแบ่งประเภทเป็นวิธีการต่างๆ ขึ้นอยู่กับขนาดของชิ้นส่วนและลักษณะของลำดับ โดยมีข้อกำหนดทั่วไปในการใช้เอนไซม์เครื่องมือ การทำ Overlap PCR ซึ่งใช้หลักการเดียวกับวิธี DNA polymerase นั้นทำได้ง่ายและรวดเร็ว วิธีการ BioBrick และ BglBrick ซึ่งใช้ไอโซไซโซเมอร์ช่วยให้ประกอบชิ้นส่วนได้มาตรฐาน แม้ว่าวิธีการ BioBrick จะไม่เหมาะกับโปรตีนฟิวชันก็ตาม วิธีการโคลนนิ่ง Golden Gate ซึ่งใช้เอนไซม์ตัดจำเพาะชนิด IIS ช่วยให้เชื่อมต่อชิ้นส่วนหลายๆ ชิ้นได้อย่างราบรื่นและมีประสิทธิภาพ วิธีการประกอบแบบ Gibson ซึ่งใช้เอนไซม์เครื่องมือหลายๆ ชนิดรวมกัน ช่วยให้เชื่อมต่อชิ้นส่วนได้ราบรื่นและมีขนาดถึงหลายร้อยกิโลเบส การออกแบบส่วนประกอบ DNA ที่ได้มาตรฐานช่วยเพิ่มอัตราการใช้ชิ้นส่วนที่มีอยู่

เทคนิคการประกอบในร่างกาย

แม้ว่า ในหลอดทดลอง ชิ้นส่วนที่ประกอบกันแล้วอาจมีขนาดถึงหลายร้อยกิโลไบต์ แต่ผลผลิตมักไม่เพียงพอ จึงจำเป็นต้องใช้สิ่งมีชีวิตขยายพันธุ์ เช่น Escherichia coli ในการประกอบชิ้นส่วนที่มีขนาดเกิน 20 กิโลเบส มักใช้ระบบรีคอมบิแนนท์ภายในสิ่งมีชีวิต เช่น แบคทีเรีย Bacillus subtilis ยีสต์ และแบคทีเรียดัดแปลงพันธุกรรม ยีสต์ซึ่งเป็นโฮสต์ที่ใช้กันทั่วไปได้รับการยอมรับถึงความสามารถในการรีคอมบิแนนท์แบบโฮโมโลกัสที่มีประสิทธิภาพมาหลายปีแล้ว สามารถใช้ประกอบโครโมโซมเทียมที่มีความยาวได้ถึงหลายเมกะเบส (Mb) นอกจากนี้ Saccharomyces cerevisiae ยังแสดงให้เห็นถึงความทนทานต่อความยาวของโครโมโซมได้อย่างยอดเยี่ยม ซึ่งเป็นพื้นฐานทางทฤษฎีสำหรับการใช้ยีสต์ในการสร้างโครโมโซมที่ยาวเป็นพิเศษในสิ่งมีชีวิตระดับสูง

การใช้งาน

Yaohai Bio-Pharma ใช้หลักๆ สองวิธีในการสังเคราะห์ยีน ได้แก่ การประกอบลิเกสและการประกอบดีเอ็นเอโพลีเมอเรส วิธีการประกอบลิเกสจะเชื่อมต่อชิ้นส่วนโอลิโกนิวคลีโอไทด์ที่ฟอสโฟรีเลต 5' ที่ทับซ้อนกันและไฮบริดไดซ์ให้เป็นดีเอ็นเอสายคู่โดยใช้ดีเอ็นเอไลเกส วิธีการประกอบโพลีเมอเรสจะใช้ดีเอ็นเอโพลีเมอเรสเพื่อขยายชิ้นส่วนโอลิโกนิวคลีโอไทด์ที่ทับซ้อนกันผ่านไฮบริดไดเซชัน การได้ส่วนผสมที่มีความยาวต่างกัน และสุดท้ายขยายชิ้นส่วนที่ประกอบสำเร็จตามความยาวเต็มโดยใช้ไพรเมอร์ Yaohai สามารถช่วยให้ลูกค้าตอบสนองความต้องการเฉพาะในการสังเคราะห์ยีนได้

นอกจากนี้เรายังกระตือรือร้นในการแสวงหาพันธมิตรระดับสถาบันหรือรายบุคคลทั่วโลก เราเสนอค่าตอบแทนที่แข่งขันได้มากที่สุดในอุตสาหกรรม หากคุณมีคำถามใด ๆ โปรดติดต่อเรา: [email protected]