เทคนิคการประกอบแบบใหม่สำหรับการสังเคราะห์ยีนขนาดใหญ่

เทคโนโลยีการประกอบสำหรับการสังเคราะห์ชิ้น DNA ขนาดใหญ่จากศูนย์เป็นรากฐานสำคัญของการสังเคราะห์ยีน โดยครอบคลุมถึงวิธีการต่าง ๆ เช่น BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, Gibson assembly, CPEC และ Overlap PCR เนื่องจากข้อจำกัดของเทคโนโลยีปัจจุบันในการสังเคราะห์ DNA ความยาวของยีนอย่างแม่นยำในขั้นตอนเดียว จึงจำเป็นต้องรวมเทคนิคการประกอบ in vitro และ in vivo เพื่อประกอบชิ้นส่วนโอลิโกนิวคลีโอไทด์ที่สังเคราะห์เป็นส่วนๆ ให้กลายเป็นชิ้น DNA ขนาดยาว

เทคนิคการประกอบ in vitro

พวกมันถูกแบ่งออกเป็นหลายวิธีตามขนาดของเศษและลักษณะของลำดับ โดยมีข้อกำหนดเบื้องต้นคือการใช้เอนไซม์เครื่องมือ โอเวอร์แลปพีซีอาร์ ซึ่งอาศัยวิธีดีเอ็นเอโพลิเมอเรส มีขั้นตอนที่ง่ายและรวดเร็ว วิธีไบโอบริกและบีจีแอลบริกซึ่งพึ่งพาไอโซชิซอมเมอร์ ช่วยให้มีการประกอบมาตรฐานได้ แม้ว่าวิธีไบโอบริกจะไม่เหมาะสำหรับโปรตีนฟิวชั่นก็ตาม วิธีโกลเด้นเกตคลอ닝ซึ่งอาศัยเอนไซม์ตัดเชื่อมชนิด IIS ช่วยให้เชื่อมต่อแบบไร้รอยต่อของเศษหลายชิ้นได้อย่างมีประสิทธิภาพ วิธีกิบสันแอสเซมบลีซึ่งใช้เอนไซม์เครื่องมือหลายชนิดช่วยให้เชื่อมต่อแบบไร้รอยต่อโดยเศษสามารถมีขนาดได้ถึงหลายร้อยกิโลเบส การออกแบบมาตรฐานขององค์ประกอบดีเอ็นเอช่วยเพิ่มอัตราการใช้งานของเศษที่มีอยู่

เทคนิคการประกอบในเซลล์

แม้ว่า ในหลอดทดลอง เศษที่ถูกประกอบสามารถมีขนาดได้ถึงหลายร้อยกิโลเบส แต่ผลผลิตมักจะไม่เพียงพอ จำเป็นต้องขยายด้วยสิ่งมีชีวิต เช่น Escherichia coli. ในการรวมชิ้นส่วนที่มีขนาดเกิน 20 กิโลเบส ระบบ рекомбินันต์ในสิ่งมีชีวิตมักถูกนำมาใช้ เช่น Bacillus subtilis ยีสต์ และแบคทีเรียที่ผ่านการดัดแปลงแล้ว ยีสต์ซึ่งเป็นโฮสต์ที่ใช้กันอย่างแพร่หลาย มีความสามารถในการรีคอมไบน์โฮโมล็อกัสที่มีประสิทธิภาพสูงมาเป็นเวลานานแล้ว สามารถใช้ในการสร้างโครโมโซมเทียมที่มีความยาวได้ถึงหลายเมกะเบส (Mb) นอกจากนี้ Saccharomyces cerevisiae ยังแสดงให้เห็นถึงความทนทานที่ยอดเยี่ยมต่อความยาวของโครโมโซม ซึ่งเป็นพื้นฐานทางทฤษฎีสำหรับการใช้ยีสต์ในการสร้างโครโมโซมที่มีความยาวมากในสิ่งมีชีวิตระดับสูง

การประยุกต์ใช้

Yaohai Bio-Pharma ใช้วิธีการประกอบหลักสองวิธีสำหรับการสังเคราะห์ยีน: การประกอบด้วยเอนไซม์ลิกาส และการประกอบด้วย DNA polymerase วิธีการประกอบด้วยเอนไซม์ลิกาส เชื่อมชิ้นส่วนโอลิโกนิวคลีโอไทด์ที่มีฟอสเฟตที่ปลาย 5' เข้าด้วยกันเป็น DNA คู่ผ่านกระบวนการไฮบริดและซ้อนทับโดยใช้ DNA ligase ส่วนวิธีการประกอบด้วย DNA polymerase จะใช้ DNA polymerase เพื่อขยายชิ้นส่วนโอลิโกนิวคลีโอไทด์ที่ซ้อนทับกันผ่านกระบวนการไฮบริด ได้รับสารผสมที่มีความยาวแตกต่างกัน และในที่สุดก็ขยายชิ้นส่วนที่ประกอบสำเร็จทั้งหมดโดยใช้ไพรเมอร์ Yaohai สามารถช่วยลูกค้าให้ตรงตามข้อกำหนดเฉพาะในการสังเคราะห์ยีนได้

เราได้ดำเนินการค้นหาพันธมิตรระดับโลกทั้งหน่วยงานหรือบุคคลทั่วไปอย่างแข็งขัน เราเสนอค่าตอบแทนที่แข่งขันได้มากที่สุดในอุตสาหกรรม หากคุณมีคำถามใด ๆ กรุณาติดต่อเราได้โดยตรง: [email protected]