Optimizacija procesa čiščenja za rekombinantno človeško insulin

V zadnjih letih je rast pacientov z diabetom pripeljala do povečane potrebe po insulinu, vendar pa je dostopen in zanesljiv insulin v kratkem izročilu. Učinkovita in cenovno ugodna proizvodnja insulina je ključna. Glavno se proizvaja prek Escherichia coli (E. coli) in kvasov zaradi hitrega rasti in nizkih stroškov, E. coli pa sproža zahtevne nadaljnje postope.

Pregled nadaljnjega obdelovanja:

Čiščenje rekombinantnega človeškega insulina iz inkluzijskih telesic E. coli vključuje več korakov, vsebine: odkupanje, umivanje, raztopljanje in oksidacijo, odsekanje, zamenjava buferja, hromatografsko čiščenje,沉淀, renatracijo, enzimsko odsekanje in formuliranje.

Yaohai Bio-Pharma si pravi širok izkušenj v proizvodnji in čiščenju rekombinantnega insulina, skupaj z ekipo strokovnjakov, kar zagotavlja, da bo vaša proizvodnja insulina zaključena z visoko učinkovitostjo. S tem, da izkoristimo izkušnje iz stojev projektov, Yaohai prijazno povzema, kako optimizirati proces nadaljnega čiščenja za rekombinantni človeški insulin.

Obnovitev in umivanje inkluzijskih teles:

Celi se razstavijo z mehaničnimi metodami (kot ultrazvok, visoko tlakova homogenizacija) ali z obravnavo lizosoma, nato pa jih umivamo s pomagališki smesi (vsebijo ureo, Triton X-100 itd.), da odstranimo nečistote. Med umivanjem je potrebno optimizirati parametre, da se zagotovi kakovost proteina hkrati z nadzorom stroškov.

Raztopljanje inkluzijskih teles in oksidacija:

Z visoko koncentracijo denaturantov (kot je hidrohidrid gvinidin in urea) se raztopijo inkluzijska telesa, pri čemer dodamo ditioltreitol ali β-merkaptoetanol, da preprečimo oblikovanje napačnih disulfidskih vezi. pH in temperatura imata velik vpliv na reakcije raztopljanja in oksidacije.

Klepanje in zamenjava pomagališke smese:

Cianogen bromida se uporablja za odstranitev N-terminalnega začetnega aminokisline, vendar povzroča probleme s toksiciteto in nizko specifičnostjo. Zamenjava buferja prek dialize, ultrafiltracije ali kromatografije po velikosti odstrani škodljive sestavine v pripravi na nadaljnje operacije.

Kromatografska čiščenja in沉淀iranje:

Za čiščenje insulina se uporabljajo različne kromatografske metode, vključno z afinno kromatografijo, kromatografijo ionskih zamens, obratno fazno kromatografijo, hidrofobno interakcijsko kromatografijo in kromatografijo po velikosti. Metode precipitationa, kot so precipitation po pH in kristalizacija zinkom, se uporabljajo za odstranitev nečistote in zakončno koncentracijo proteina.

Renaturation:

Dissolviran protein se razredite v renaturation bufferju za spodbujanje pravega oblikovanja disulfidnih vez in prihrtevanja proteina. Protein-folding tekoča kromatografija in dializa sta tudi metodi, ki jih uporabljamo za renaturation.

Enzymatsko razcepanje in formuliranje:

Trypsin in carboxypeptidaza B se uporabljata za razcepanje C-peptida, s čimer nastane aktivni insulinski heterodimer. Nazadnje se uporabljata kristalizacija in liofilizacija za odstranitev ostanjkov soli in buferjev, pripravljajoč stabilno formulacijo. Dodane so tudi določene dodatke (kot je cink in protamin), da se izpolnijo različne klinične potrebe.

Zaključek:

Obdelava po proizvodnji insulina iz E. coli je zapletena. Prihodnja pozornost bi morala biti usmerjena v optimizacijo teh korakov za učinkovito in ekonomično proizvodnjo, da se izpolni povpraševanje in zmanjšajo stroški.

Yaohai Bio-Pharma aktivno išče tudi institucionalne ali posamezne globalne partnerje in ponuja najbolj konkurenčno nakazilo v industriji. Če imate katere koli vprašanje, prosimo, da nas kontaktirate: [email protected]