Optimiziranje postopka čiščenja za rekombinantni humani insulin

V zadnjih letih je rast bolnikov s sladkorno boleznijo povzročila povpraševanje po insulinu, vendar cenovno dostopnega insulina primanjkuje. Učinkovita in ekonomična proizvodnja insulina je ključnega pomena. E. coli, ki se zaradi hitre rasti in nizkih stroškov večinoma proizvaja z Escherichia coli (E. coli) in kvasovkami, se sooča s kompleksno nadaljnjo predelavo.

Pregled nadaljnje obdelave:

Čiščenje rekombinantnega humanega insulina iz inkluzijskih telesc E. coli vključuje več korakov, vključno z rekuperacijo, pranjem, solubilizacijo in oksidacijo, cepitvijo, izmenjavo pufra, kromatografskim čiščenjem, obarjanjem, renaturacijo, encimsko cepitvijo in formulacijo.

Yaohai Bio-Pharma se ponaša z bogatimi izkušnjami pri proizvodnji in čiščenju rekombinantnega insulina, skupaj z ekipo strokovnjakov, ki zagotavlja, da je vaša proizvodnja insulina dokončana z visoko učinkovitostjo. Yaohai z izkoriščanjem naših izkušenj iz stotin projektov prijazno povzema, kako optimizirati nadaljnji proces čiščenja za rekombinantni humani insulin.

Inkluzija Obnova in umivanje telesa:

Celice se uničijo z mehanskimi metodami (kot je ultrazvočna obdelava, visokotlačna homogenizacija) ali obdelavo z lizocimom, ki ji sledijo pralni pufri (ki vsebujejo sečnino, Triton X-100 itd.), da se odstranijo nečistoče. Med pranjem je treba parametre optimizirati, da se zagotovi kakovost beljakovin in hkrati nadzorujejo stroški.

Solubilizacija in oksidacija inkluzijskega telesa:

Denaturanti z visoko koncentracijo (kot sta gvanidinijev klorid in sečnina) se uporabljajo za raztapljanje inkluzijskih teles z dodatkom ditiotreitola ali β-merkaptoetanola, da se prepreči nastanek nepravilnih disulfidnih vezi. pH in temperatura pomembno vplivata na reakcije raztapljanja in oksidacije.

Cepitev in izmenjava pufra:

Cianogen bromid cepitev se uporablja za odstranitev iniciacijske aminokisline N-terminala, vendar povzroča težave s toksičnostjo in nizko specifičnostjo. Z dializo, ultrafiltracijo ali kromatografijo z izključitvijo velikosti puferska izmenjava odstrani škodljive reagente v pripravi na naslednje operacije.

Kromatografsko čiščenje in obarjanje:

Za čiščenje insulina se uporablja več kromatografskih tehnik, vključno z afinitetno kromatografijo, ionsko izmenjevalno kromatografijo, kromatografijo z reverzno fazo, hidrofobno interakcijsko kromatografijo in kromatografijo z izključitvijo velikosti. Metode obarjanja, kot sta obarjanje s pH in kristalizacija cinka, se uporabljajo za odstranjevanje nečistoč in koncentriranje beljakovin.

Renaturacija:

Raztopljene beljakovine se razredčijo v renaturacijskem pufru, da se spodbudi pravilna tvorba disulfidnih vezi in zvijanje beljakovin. Tekočinska kromatografija z zvijanjem beljakovin in dializa sta tudi metodi, ki se uporabljata za renaturacijo.

Encimsko cepitev in formulacija:

Tripsin in karboksipeptidaza B se uporabljata za cepitev C-peptida, pri čemer nastane aktivni insulinski heterodimer. Na koncu uporabimo kristalizacijo in liofilizacijo za odstranitev ostankov soli in pufrov, s čimer pripravimo stabilno formulacijo. Posebni dodatki (kot sta cink in protamin) so dodani za izpolnjevanje različnih kliničnih potreb.

ugotovitev:

Nadaljnja predelava insulina iz E. coli je zapleteno. Prihodnji poudarek bi moral biti na optimizaciji teh korakov za učinkovito in gospodarno proizvodnjo, da bi zadovoljili povpraševanje in zmanjšali stroške.

Yaohai Bio-Pharma prav tako aktivno išče institucionalne ali individualne globalne partnerje in ponuja najbolj konkurenčno nadomestilo v industriji. Če imate kakršna koli vprašanja, nas kontaktirajte: [email protected]