Optimizacija celinskega integritete E. coli za biofarmacevtsko proizvodnjo

V področju biofarmacevtskih sredstev igra Escherichia coli (E. coli) ključno vlogo kot nosilec za izraz recombinantnih beležin. Celularna celovitost E. coli je pomembna za obseg, kakovost in stroške proizvodnje beležin. Ta celovitost se glavno nanaša na strukturo in funkcijo notranje membrane (IM) in zunanje membrane (OM).

Yaohai Bio-Pharma ima 15 let izkušenj s fermentacijo E. coli in izrazom recombinantnih beležin. Uporabljamo različne strategije, da ohranimo visoko celularno celovitost E. coli, pri čemer prenosnost plazmidov presega 1g/L v kultivacijskem ciklu trajajočem 30 ur. S tem, da si prizadevamo po učinkoviti mikrobiološki izrazi, je Yaohai Bio-Pharma izpeljala več učinkovitih strategij za spremljanje in izboljšanje celularne celovitosti E. coli med biotehnološko proizvodnjo.

Tehnike za spremljanje celularne celovitosti E. coli

Citarne analize: Uporabljajo fluorescenčne barvnine za razlikovanje stanj celic, kot je propidijev jodid za določanje življenjske sposobnosti celic in SYTO9 za oceno prehodnosti OM. Vendar pa zahtevajo visoke stroške barvnin in kompleksne operacije.

Kolorimetrične metode: Odbijo celilske lizate s detekcijo vsebine DNA, enzimske aktivnosti itd. v nadomorsku, kot je uporaba sredstva PicoGreen in testiranje aktivnosti alkalne fosfataze. Te metode so vsekakor obremenljive in zahtevajo dragocenne barvline.

Visoko učinkovita kromatografija v tekočem fazi: Uporablja se za izvenmrežno detekcijo koncentracij ekstracelularnih proizvodov za oceno prehodnosti OM. Vendar pa je avtomatizacija kompleksna in čas analize dolg.

Vibracijske spektroskopsko metode: Kot sta blizuinfračrna in srednje infračrna spektroskopija, ki imata potencialne uporabe, vendar je treba premagati spektralno onesnaženost in izzive pri analizi podatkov.

Dielektrična spektroskopija: Vrednoti celinsost membre s meritvijo impedancije celulskih sušin, kar omogoča realno-časovno nadzorovanje v toku. Vendar je občutljiva na motnje in težko kalibrirana.

Biosenzorji: Lahko zaznamo spojine, ki se izlečijo iz celic ali periplasma, vendar srečujejo težave, kot so težave pri regeneraciji senzorja.

Meritve viskoznosti in gostote: Nizek strošek in hitra analiza, vendar pomanjkanje selektivnosti ter zahteva upoštevanja večkosovnih podatkov za odločanje.

Faktorji, ki vplivajo na celinsost

Genetska inženiringa: Spreminja integriteto OM prek genetskega inženiringa, na primer mutacije lipoproteinskih genov, vendar lahko vpliva na rast ŠTR.

Uvrstena stresa: Prekomerno izrazitev rekombinantnih beljakovin vodi k metabolični povzetini, ki vpliva na fiziologijo celice. Zato je potrebno razumno urejanje ravni izražanja.

Hitrost hrane substracta: Obstoječe tako previsoke kot prenizke hitrosti hrane vplivata na liho celic in integriteto OM.

Temperatura in aeracija: Visoke temperature in nizka razpoložljivost kisika povečata stres izražanja in onesnaženost OM, vendar se določiti učinki različijo.

Osmotika: Uporabljajo se za sprostitev periplazmatičnih beležin, vendar paščijo življenjsko sposobnost celic, kar omejuje njihovo uporabo.

Zaključek: Buduča raziskovanja morajo globlje raziskati mehanizme in pogoje popravkov membran, da precizno nadzorujejo integriteto celinske membrane. Optimizacija metod spremljanja in analiza vplivnih faktorjev se pričakuje, da bodo izboljšale kakovost produkta, s tem spodbujanje razvoja biotehnološke industrije.

Iščemo tudi institucionalne ali posamezne globalne partnerje. Ponujamo najbolj konkurenčno odpravo v industriji. Če imate katere koli vprašanje, nas prosimo, da nas kontaktirate na [email protected]