Zagovarjanje metod modifikacije reporterske RNA

Pri izbiri, katera metoda modifikacije reporterske mRNA je boljša, ni dokončnega odgovora, saj ima vsaka metoda in vsak reporterski gen svoje prednosti in uporabne scenarije. Tukaj je nekaj običajnih metod spreminjanja mRNA in reporterskih genov, skupaj z njihovimi značilnostmi in primernostjo.

Metode modifikacije mRNA

Metilacija:

1. m6A: Povezano s stabilnostjo mRNA, spajanjem, prevajanjem in obdelavo miRNA. Izzivi pri odkrivanju vključujejo izbiro in lokalizacijo protiteles.
2. 5' Cap Nm: Izboljša stabilnost, spajanje, poliadenilacijo in jedrski izvoz. Pomaga razlikovati lastno RNA od tuje RNA.
3. Psevdouridilacija: Spremeni kodone, izboljša stabilnost in se odziva na stres. Katalizirajo ga psevdouridin sintaze.

Predstavitve nenaravnih nukleotidov:

1. Uveden med transkripcijo z dvojno strategijo kemijske modifikacije. Izboljša stabilnost, učinkovitost in izražanje beljakovin.

Reporterski geni

1. Gen za zeleni fluorescentni protein (GFP): Prednosti: enostavno zaznavanje, stabilne fluorescenčne lastnosti, nestrupeno za celice, primerno za slikanje živih celic. Slabosti: omejena intenzivnost fluorescence.
2. Izboljšan zeleni fluorescentni protein (eGFP): Prednosti: Več kot 6-krat svetlejši od divjega tipa GFP, zaradi česar je primernejši kot reporterski gen za proučevanje izražanja genov, regulacije, celične diferenciacije ter lokalizacije in transporta beljakovin v organizmih.
3. Rdeči fluorescentni proteini (npr. mCherry): Prednosti: daljše valovne dolžine vzbujanja in emisije, kar ima za posledico nižje ozadje med znotrajceličnim slikanjem, odlično fluorescenčno svetlost in fotostabilnost ter manjšo celično toksičnost. Slabosti: v določenih poskusnih pogojih se morda ne uporablja tako pogosto kot GFP.
4. Luciferaza kresnic: Prednosti: V prisotnosti ATP, magnezijevih ionov in kisika lahko katalizira oksidacijo luciferina v oksiluciferin, ki oddaja bioluminiscenco. Primeren je za uporabo kot kontrola za preučevanje učinkovitosti prevajanja ciljnih genov v celicah sesalcev, viabilnosti celic in in vivo slikovnih testov.

zaključek

Pri izbiri, katera metoda modifikacij reporterske mRNA je boljša, je to odvisno od specifičnih eksperimentalnih ciljev, raziskovalnega ozadja in eksperimentalnih pogojev. Na primer, če je potrebna visoka občutljivost, je morda boljša izbira eGFP. Če je za zmanjšanje motenj v ozadju potrebno slikanje pri daljših valovnih dolžinah, so morda bolj primerni rdeči fluorescentni proteini, kot je mCherry. Poleg tega je mogoče na podlagi posebnih modifikacijskih potreb mRNA (npr. izboljšanje stabilnosti, izboljšanje učinkovitosti prevajanja) izbrati ustrezno modifikacijsko metodo.

Yaohai Bio-Pharma kot prvi in ​​največji mikrobni biološki CRDMO na širšem Kitajskem ponuja celovite rešitve po meri na enem mestu ali samostojne storitve, ki segajo od sinteze RNA, inženiringa in konstrukcije sevov, razvoja procesov navzgor in navzdol, do GMP ali ne. - Proizvodnja zdravilnih učinkovin na ravni GMP ter storitve polnjenja in končne obdelave za različne modalitete, kot so mRNA, circRNA, plazmidna RNA, rekombinantne beljakovine, peptide, encime, enodomenska protitelesa in VLP za humano in veterinarsko uporabo.

Yaohai Bio-Pharma prav tako aktivno išče institucionalne ali individualne globalne partnerje in ponuja najbolj konkurenčno nadomestilo v industriji. Če imate kakršna koli vprašanja, nas kontaktirajte: [email protected]