Podpiranje metod spreminjanja poročilnega RNA

Ko izbiramo, katera metoda sprememb reporterjeve mRNA je preferenčna, ni zaključne odgovore, saj vsaka metoda in reporterjski gen imata svoje prednosti in primernosti v določenih scenarijih. Poglejmo si nekatere običajne metode spremembe mRNA in reporterjske gene skupaj z njihovimi lastnostmi in primerljivostjo.

metode spremembe mRNA

Metilacija:

1. m6A : Povezana s stabilnostjo mRNA, spreminjanjem, prevodom in obdelovanjem miRNA. Izvajejo se težave pri zaznavanju, vsebine izbire antibodies in lokacije.
2. 5' Cap Nm : Poveča stabilnost, spreminjanje, poliadenilacijo in jedrsno izvoz. Pomaga ločiti sam-RNA od tuje RNA.
3. Pseudouridilacija : Spremeni kodone, poveča stabilnost in reagira na stres. Katalizirajo jo pseudouridilsintetaze.

Uvedba nepriročnih nukleotidov:

1. Uvedeno med transkripcijo z dvokratno kemično modifikacijsko strategijo. Poveča stabilnost, učinkovitost in izraz proteina.

Porocilne gene

1. Gen za zeleno fluorescenčno beljino (GFP) : Prednosti: Enostavno zaznati, stabilne fluorescenčne lastnosti, nevredne za celice, primerni za slikanje živih celic. Nesreče: Omejena fluorescenčna intenziteta.
2. Poboljšana zelena fluorescenčna beljakina (eGFP) : Prednosti: Več kot šestkrat jasnije od divjega tipa GFP, kar ga dela primernejsega za porocilni gen pri študiju izražanja genov, regulacije, diferenciacije celic ter lokacije in prevoza proteina v organizmih.
3. Rdeče fluorescenčne beljine (npr. mCherry) : Prednosti: Daljše valovne dolžine pri izboljšanju in emisiji, kar pomeni manjši ozadji med intracelularnim slikanjem, odlična fluorescenčna jasnost in fotostabilnost ter nižja celinska toksičnost. Nesreče: Morda niso tako pogosto uporabljane kot GFP v določenih eksperimentalnih pogojev.
4. Oganj luciferaza : Prednosti: V prisotnosti ATP, magnezijevih ionov in kisika lahko katalizira oksidacijo luciferina v oksiluciferin, s čimer izpušča bioluminescenjo. Priporočljivo je uporabljati kot kontrolno sredstvo za študijo učinkovitosti prevoda ciljnih genov v mammalnih celicah, prežetnosti celic in testov v vivo slikovanja.

Zaključek

Ko izbirate, katere metode sprememb reporter mRNA je boljše uporabiti, odvisno je od določenih poskusnih ciljev, raziskovalnih ozadij in poskusnih pogojev. Na primer, če je potrebna visoka občutljivost, eGFP morda predstavlja boljši izbor. Če je potrebno slikovanje na daljših valovnih dolžinah, da se zmanjša ozadje, so rdeče fluorescenčne proteine, kot je mCherry, verjetno bolj primerni. Poleg tega, glede na določene potrebe po spremembi mRNA (npr. povečanje stabilnosti, izboljšanje učinkovitosti prevoda), lahko izberete ustrezno metodo spremembe.

Kot prva in največja CRDMO mikrobioloških biologičnih sredstev v Veliki Kitajski ponuja Yaohai Bio-Pharma rešitve na mero ali posamezne storitve, ki se razlagajo od sinteze RNA, inženiringa in gradnje štrikov, razvoja gornjega in spodnjega procesa, do proizvodnje snovi za medicinske namene na ravni GMP ali ne-GMP ter storitev izpolnjevanja za različne oblike, kot so mRNA, circRNA, plazmidna RNA, rekombinantni proteini, peptidi, enzimi, enoskalbni antibodies in VLP-ji za človeško in veterinarsko uporabo.

Yaohai Bio-Pharma aktivno išče tudi institucionalne ali posamezne globalne partnerje in ponuja najbolj konkurenčno nakazilo v industriji. Če imate katere koli vprašanje, prosimo, da nas kontaktirate: [email protected]