Plazmidová DNA, as in vitro transkripčný (IVT) templát, je dôležitá surovina na výrobu mRNA. Vysoký výťažok, vysoká purifikácia a vysoká výťažnosť plazmidovej DNA sú hlavné cieľ počas vývoja plazmidového procesu.
Yaohai Bio-Pharma poskytuje komplexné riešenie pre vývoj plazmidov, vrátane upstream (fermentácia), downstream (purifikácia) vývoja procesu a charakterizácie procesov a validácie procesov. Máme rozsiahle skúsenosti so zlepšovaním výťažku plazmidov a ich izoláciou z komplexných matríc vývojom a optimalizáciou procesov fermentácie, čistenia a odstraňovania nečistôt.
Základný bioproces na výrobu plazmidov zahŕňa: Escherichia coli (E. coli) fermentácia, zber buniek a alkalická lýza, čírenie, zahusťovanie, trojstupňový chromatografický proces (zachytenie, prechodné čistenie a leštenie) a zahustenie.
Detaily služby | Operácie jednotky | parametre |
E. coli kvasenie |
Banku pretrepte | Zloženie média, antibiotikum, objem inokula, teplota rastu atď. |
fermentor (7 l) |
Antibiotikum, objem inokula, teplota rastu, pH, rozpustený kyslík (DO), režim kŕmenia (napr. vsádzkový kŕmenie), kŕmne médium, čas fermentácie atď. |
|
Bunkový zber | mikrofiltrácia | štandard E. coli zberový proces |
Bunková lýza | Resuspendovanie buniek, alkalická lýza, neutralizácia | Alkalický pomer, čas lýzy |
objasnenie | Filtrácia | Surová filtrácia, 20 µm a 5 µm filtračná súprava (uprednostňuje sa) |
Koncentrácia | Ultrafiltrácia, filtrácia s tangenciálnym prietokom | Veľkosť pórov (alebo NMWC), transmembránový tlak (TMP), tok, pomer objemu filtrátu k ploche membrány |
Trojstupňová chromatografia | Vylučovacia chromatografia (SEC) alebo gélová filtračná chromatografia (GFC) | Dĺžka a priemer kolóny, zloženie pufra, injekčný objem, zloženie mobilnej fázy (adsorpcia a desorpcia), pH, prietoková rýchlosť, ekvilibrácia, väzba, premývacie a elučné podmienky. |
Afinitná chromatografia (AF) | ||
Aniónová výmenná chromatografia (AEX) | ||
Koncentrácia | Ultrafiltrácia, filtrácia s tangenciálnym prietokom | Veľkosť pórov (alebo NMWC), transmembránový tlak (TMP), tok, pomer objemu filtrátu k ploche membrány |
Ďalšie riešenia procesov čistenia biologických látok |