Поддержка методов модификации репортерной РНК

При выборе предпочтительного метода модификации репортерной мРНК нет однозначного ответа, поскольку каждый метод и репортерный ген имеют свои собственные преимущества и применимые сценарии. Вот некоторые распространенные методы модификации мРНК и репортерные гены, а также их характеристики и пригодность.

Методы модификации мРНК

Метилирование:

1. м6А: Связано со стабильностью мРНК, сплайсингом, трансляцией и процессингом miRNA. Проблемы обнаружения включают выбор антител и локализацию.
2. 5' Cap Нм: Улучшает стабильность, сплайсинг, полиаденилирование и ядерный экспорт. Помогает отличить собственную РНК от чужеродной РНК.
3. Псевдоуридилация: Изменяет кодоны, повышает стабильность и реагирует на стресс. Катализируется псевдоуридинсинтазами.

Введение неприродных нуклеотидов:

1. Введено во время транскрипции с помощью стратегии двойной химической модификации. Повышает стабильность, эффективность и экспрессию белка.

Репортер Генс

1. Ген зеленого флуоресцентного белка (GFP): Преимущества: Легко обнаружить, стабильные свойства флуоресценции, нетоксичен для клеток, подходит для визуализации живых клеток. Недостатки: Ограниченная интенсивность флуоресценции.
2. Улучшенный зеленый флуоресцентный белок (eGFP): Преимущества: более чем в 6 раз ярче, чем GFP дикого типа, что делает его более подходящим в качестве репортерного гена для изучения экспрессии генов, регуляции, дифференцировки клеток, а также локализации и транспорта белков внутри организмов.
3. Красные флуоресцентные белки (например, mCherry): Преимущества: Более длинные длины волн возбуждения и испускания, что приводит к более низкому фону во время внутриклеточной визуализации, превосходной яркости флуоресценции и фотостабильности, а также более низкой клеточной токсичности. Недостатки: Может не так часто использоваться, как GFP в определенных экспериментальных условиях.
4. Люцифераза светлячка: Преимущества: В присутствии АТФ, ионов магния и кислорода он может катализировать окисление люциферина в оксилюциферин, испуская биолюминесценцию. Подходит для использования в качестве контроля для изучения эффективности трансляции целевых генов в клетках млекопитающих, жизнеспособности клеток и анализов визуализации in vivo.

Заключение

Выбор предпочтительного метода модификации репортерной мРНК зависит от конкретных экспериментальных целей, исследовательского опыта и экспериментальных условий. Например, если требуется высокая чувствительность, eGFP может быть лучшим выбором. Если требуется визуализация на более длинных волнах для снижения фоновых помех, красные флуоресцентные белки, такие как mCherry, могут быть более подходящими. Кроме того, на основе конкретных потребностей в модификации мРНК (например, повышение стабильности, улучшение эффективности трансляции) можно выбрать соответствующий метод модификации.

Будучи первым и крупнейшим CRDMO по микробиологическим препаратам в Большом Китае, Yaohai Bio-Pharma предлагает комплексные индивидуальные решения или отдельные услуги, начиная от синтеза РНК, проектирования и конструирования штаммов, разработки начальных и конечных процессов до производства лекарственных веществ на уровне GMP или не-GMP, а также услуг по заполнению и финишной обработке для различных модальностей, таких как мРНК, кольцевая РНК, плазмидная РНК, рекомбинантные белки, пептиды, ферменты, однодоменные антитела и вирусоподобные частицы для использования в медицине и ветеринарии.

Yaohai Bio-Pharma также активно ищет институциональных или индивидуальных глобальных партнеров и предлагает самую конкурентоспособную компенсацию в отрасли. Если у вас есть вопросы, пожалуйста, свяжитесь с нами: [email protected]