Plasmid DNA, som vitro transkripsjonsmal (IVT), er et viktig råmateriale for mRNA-produksjon. Høyt utbytte, høy rensing og høy utvinning av plasmid-DNA er det viktigste Målet under plasmidprosessutvikling.
Yaohai Bio-Pharma tilbyr én-stopp-løsning for plasmidutvikling, inkludert oppstrøms (fermentering), nedstrøms (rensing) prosessutvikling og prosesskarakterisering og prosessvalidering. Vi har lang erfaring med å forbedre plasmidutbyttet og isolere det fra komplekse matriser ved å utvikle og optimere fermenterings-, rensings- og fjerningsprosesser for urenheter.
Grunnleggende bioprosess for plasmidproduksjon inkluderer: Escherichia coli (E. coli) fermentering, cellehøsting og alkalisk lysis, klaring, konsentrasjon, tre-trinns kromatografiprosess (fangst, mellomliggende rensing og polering) og konsentrasjon.
Tjenestedetaljer | Enhetsdrift | parametere |
E. coli gjæring |
Rist kolbe | Mediesammensetninger, antibiotika, inokulumvolum, veksttemperatur og etc. |
gjæringskar (7 L) |
Antibiotika, inokulumvolum, veksttemperatur, pH, oppløst oksygen (DO), fôringsmodus (f.eks. fed-batch), fôringsmedium, gjæringstid og etc. |
|
Cellehøst | mikro~~POS=TRUNC | standard E. coli høstingsprosess |
Cellelyse | Celleresuspendering, alkalisk lysis, nøytralisering | Alkaliforhold, lyseringstid |
Avklaring | Filtrering | Råfiltrering, 20 µm og et 5 µm filtertog (foretrukket) |
Konsentrasjon | Ultrafiltrering, tangentiell strømningsfiltrering | Porestørrelse (eller NMWC), transmembrantrykk (TMP), fluks, filtratvolum til membranarealforhold |
Tre-trinns kromatografi | Størrelseseksklusjonskromatografi (SEC) eller gelfiltreringskromatografi (GFC) | Kolonnelengde og diameter, buffersammensetning, injeksjonsvolum, mobilfasesammensetning (adsorpsjon og desorpsjon), pH, strømningshastighet, ekvilibrering, binding, vasking og elueringsbetingelser. |
Affinitetskromatografi (AF) | ||
Anionbyttekromatografi (AEX) | ||
Konsentrasjon | Ultrafiltrering, tangentiell strømningsfiltrering | Porestørrelse (eller NMWC), transmembrantrykk (TMP), fluks, filtratvolum til membranarealforhold |
Flere biologiske renseprosessløsninger |