Податоците за мапирање на пептиди базирани на течна хроматографија-масна спектрометрија (LC-MS) ќе обезбедат големо количество информации за примарната и структурата од повисок ред на природните и рекомбинантните протеини, вклучувајќи покривање на аминокиселинската секвенца, пост-транслациони модификации (PTMs, на пр., гликозилација , оксидација, деамидација), дисулфидни врски итн.
Yaohai Bio-Pharma нуди услуги за анализа на мапирање на пептиди за вашиот целен протеин со LC-MS, за да го забрза вашето истражување за структурата на протеините.
Вклучени сме во протеинската структурна карактеристика на различни големи молекули, вклучувајќи вакцини за рекомбинантна подединица, нанотела/VHHs/ Антитела со еден домен (sdAbs), фрагменти на антитела, хормони/пептиди, цитокини, фактори за раст (GF), ензими, итн.
Регулаторни барања за мапирање на пептиди
Упатството на ICHQ6B препорачува: „Селективна фрагментација на производот во дискретни пептиди се врши со употреба на соодветни ензими или хемикалии, а добиените пептидни фрагменти се анализираат со HPLC или друга соодветна аналитичка процедура. Пептидните фрагменти треба да се идентификуваат колку што е можно со користење на техники како што се анализа на составот на аминокиселините, N-терминална секвенционирање или масена спектрометрија (MS). Пептидното мапирање на активната супстанција или медикаментозен производ (ДП) со користење на соодветно потврден метод е метод кој често се користи за да се потврди саканата структура на производот за сериско ослободување“.
Аналитички методи
| Анализа |
Методи |
| Мапирање на пептиди |
Дигестија на протеаза и течна хроматографија-масена спектрометрија (LC-MS) |
Аналитичка постапка
1. Редукција и алкилација
Целта е да се намалат дисулфидните мостови и да се блокира создадениот слободен тиол. Намалувањето на дисулфидните мостови помага да се отвори протеинската структура што го прави протеолитичкото варење поефикасно. Овој чекор исто така ќе ги скрши мостовите помеѓу синџирите во случај на протеини со повеќе синџири кои имаат дисулфидни мостови што ги поврзуваат синџирите (на пр. моноклонални антитела, mAbs).
2. Варење на протеинот со помош на ензими
Целта е да се разложи протеинот на пептиди. Ензимите ги избравме врз основа на теоретската низа на протеинот и знаењето за теоретска дигестија на протеинот со ензими. Изборот на ензими на овој начин, треба да резултира со најдобра анализа на мапирање на пептиди.
3. Анализа на дигестираните пептиди Користење на он-лајн течна хроматографија со реверзна фаза со високи перформанси со ултравиолетова (УВ) и електроспреј-масовна спектрометриска детекција (LC/ES-MS).
Сепарација на пептиди врз основа на поларитет со помош на LC (обратна фаза-LC)
Како што пептидот елуира од колоната LC, масениот спектрометар ќе генерира информации за масата заедно со информации за фрагмент јони, што ни овозможува да ја одредиме информацијата за низата. Ги користиме информациите за секвенцата за да го потврдиме идентитетот на пептидот и да обезбедиме примарни информации.
Ние исто така можеме да генерираме информации за фрагментација од пептидите додека тие влегуваат во изворот на масениот спектрометар од колоната LC. Во зависност од барањата на студијата, ова е или селективно LC-MS/MS или неселективно, што може да се смета како форма на тандем MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
