Зафатеноста на местото на N-гликозилација е физиолошка карактеристика на гликопротеините и главно произведува N-гликан. Услугата за анализа на зафатеноста на местата за N-гликозилација на Yaohai Bio-Pharma се спроведува преку дигестија, ослободување, збогатување и анализа со користење на течна хроматографија-електроспреј јонизирачка масовна спектрометрија-масена спектрометрија (LC-ESI-MS/MS).
Вклучени сме во протеинската структурна карактеристика на различни големи молекули, вклучувајќи вакцини за рекомбинантна подединица, нанотела/VHHs/ Антитела со еден домен (sdAbs), фрагменти на антитела, хормони/пептиди, цитокини, фактори за раст (GF), ензими, итн.
Регулаторни барања за зафатеност на локацијата на N-гликозилација
Според упатствата на ICH Q6B, „за гликопротеините, се одредува содржината на јаглени хидрати (неутрални шеќери, амино шеќери и сиалични киселини). Понатаму, структурата на синџирите на јаглени хидрати, моделот на олигосахариди (антенарен профил) и местото(ите) на гликозилација на полипептидниот синџир се анализирани до најдобар можен степен.
Аналитички метод
| Анализа |
Методи |
| Зафатеност на местото на N-гликозилација |
LC-MS по дигестија на дегликозилаза и протеаза |
Процедури
1. Протеинско варење на протеините за генерирање на мали пептидни фрагменти.
2. Ослободување на N-гликан користејќи ендогликозидаза H или PNGаза F. Ендогликозидазата H ја раскинува врската помеѓу двата GlcNAc остатоци во јадрото на N-поврзаните гликани, додека PNGазата F е гликоамидаза која ја прекинува врската помеѓу GlcNAc и Asn, ослободувајќи ја целата шеќерен синџир и претворање на Asn во Asp со зголемување на масата од 1-Da.
3. Збогатување на N-гликопептид преку HILIC (течна хроматографија со хидрофилна интеракција)
4. Анализа на зафатеноста на Н-поврзаната гликозилациона локација користејќи LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
