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mRNA 共転写キャッピング

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IVT RNA

mRNA共転写キャッピング

1 段階酵素キャッピング法と比較して、XNUMX 段階共転写キャッピング法はプロセスフローを大幅に削減できます。この方法は結果指向であり、インビトロ転写 (IVT) 反応にキャップ類似体を追加します。キャップ類似体は転写の開始時に導入でき、転写が完了するとキャップ構造を持つ mRNA が得られます。現在の第 XNUMX 世代キャップ類似体は、逆キャッピングを回避し、転写産物に Cap XNUMX 構造を直接追加できます。

mRNA の生体内免疫原性と翻訳効率を考慮して、IVT プロセスでは特定の種類の修飾 NTP が採用されることが多く、一般的な修飾ヌクレオチドは擬似ウリジン (Ψ)、N1-メチル擬似ウリジン (N1Ψ)、および 5-メチルシトシン (5mC) です。

未定義

未定義

図: mRNAの共転写とキャッピング反応の図

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共転写キャッピング

インビトロ転写応答（クリーンキャップアナログ）1-2
ヌクレオチド修飾 (Ψ/N1Ψ/5mC)
DNA テンプレートの除去 (DNase I)

IVT条件最適化 - オプション

反応成分の設計と最適化3-7
私たちの特徴
  • 多様なヌクレオチド修飾戦略

複数のオプションのヌクレオチド修飾戦略により、タンパク質の発現を改善できます。

  • 最適化された反応システム

高い転写率と高いキャッピング効率を実現します。

  • 安定したキャッピングプロセス

95%以上のキャッピング率を達成します。

  • RNaseの厳格な管理

実験環境および消耗品における RNase を厳密に管理することで、mRNA の分解を効果的に防止します。

ケーススタディ

Yaohai Bio-Pharma は、クリーンなキャップ類似体を使用して逆キャッピングを回避しながら Cap1 構造を直接追加する、成熟した共転写キャッピング プロセス プラットフォームを構築しました。標準化されたサンプル前処理とキャピラリー電気泳動 (CE) 検出の後、強化緑色蛍光タンパク質 (eGFP) mRNA のキャッピング率は 95% 以上に達します。

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eGFP mRNAキャッピング効率は95%以上

共転写キャッピングによって調製された eGFP mRNA と mCherry mRNA をそれぞれ 293T 細胞にトランスフェクトすると、48 時間後に強い蛍光シグナルが観察され、mRNA が 293T 細胞で効率的に発現していることが示唆されます。

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293T細胞におけるeGFP mRNAとmCherry mRNAの発現

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